通过抑制脂连蛋白(ADIPOQ)的天然反义转录物治疗脂连蛋白(ADIPOQ)相关疾病制造技术

本发明专利技术涉及反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸尤其通过靶向脂连蛋白(ADIPOQ)的天然反义多核苷酸来调节脂连蛋白(ADIPOQ)的表达和/或功能。本发明专利技术还涉及这些反义寡核苷酸的鉴定及其在治疗与脂连蛋白(ADIPOQ)表达相关的疾病与障碍中的用途。

【技术实现步骤摘要】
通过抑制脂连蛋白(ADIPOQ)的天然反义转录物治疗脂连蛋白(ADIPOQ)相关疾病本申请是以下申请的分案申请：申请日：2010年8月11日；申请号：201080046899.0；专利技术名称：同上。专利
本申请要求2009年8月11日提交的美国临时专利申请号61/232,917和2009年10月20日提交的美国临时专利申请号61/253,187的优先权。本专利技术的实施方案包括调节脂连蛋白(ADIPOQ)及相关分子的表达和/或功能的寡核苷酸。背景DNA-RNA和RNA-RNA杂交对包括DNA复制、转录和翻译在内的核酸功能的许多方面均很重要。杂交对于检测特定的核酸或改变其表达的各种技术也很重要。例如，反义核苷酸通过与靶RNA杂交来扰乱基因表达，从而干扰RNA剪接、转录、翻译和复制。反义DNA具有额外的特点是，DNA-RNA杂合体作为存在于大多数细胞类型中的核糖核酸酶H消化活性的底物。可将反义分子递送到细胞中，其如寡脱氧核苷酸(ODN)的情况，或可自内源基因将其表达为RNA分子。FDA最近批准了一种反义药物VITRAVENETM(用于治疗巨细胞病毒性视网膜炎)，这反映了反义物具有治疗效用。概述在一个实施方案中，本专利技术提供用于抑制天然反义转录物作用的方法，其通过使用靶向天然反义转录物的任何区域的一种或多种反义寡核苷酸导致上调相应有义基因来进行。本文亦预期天然反义转录物的抑制可通过被认为落入本专利技术范围内的siRNA、核酶和小分子来实现。一个实施方案提供一种体内或体外调节患者细胞或组织中脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括将所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与包含以下核苷酸内的5-30个连续核苷酸的多核苷酸的反向互补序列具有至少50％的序列同一性：SEQIDNO:3的1-416位核苷酸或SEQIDNO:4的1-3591位核苷酸或SEQIDNO:5的1-875位核苷酸或SEQIDNO:6的1-194位核苷酸；藉此体内或体外调节患者细胞或组织中的脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸的功能和/或表达。在另一实施方案中，寡核苷酸靶向脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸的天然反义序列，例如在SEQIDNO:3-6中所示的核苷酸及其任何变体、等位基因、同源物、突变体、衍生物、片段和互补序列。反义寡核苷酸的实例示于SEQIDNO:7-31。另一实施方案提供一种体内或体外调节患者细胞或组织中脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括将所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸的反义物的反向互补序列具有至少50％的序列同一性；藉此体内或体外调节患者细胞或组织中的脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸的功能和/或表达。另一实施方案提供一种体内或体外调节患者细胞或组织中脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括将所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与脂连蛋白(ADIPOQ)反义多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少50％的序列同一性；藉此体内或体外调节患者细胞或组织中的脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸的功能和/或表达。在一个实施方案中，一种组合物包含一种或多种与有义和/或反义脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸结合的反义寡核苷酸。在另一实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个修饰或取代核苷酸。在另一实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个修饰键。在又一实施方案中，修饰核苷酸包括含硫代磷酸酯、甲基膦酸酯的修饰碱基，肽核酸，2’-O-甲基、氟-或碳、亚甲基或其它锁定核酸(LNA)分子。优选修饰核苷酸是锁定核酸分子，包括α-L-LNA。在另一实施方案中，将寡核苷酸皮下、肌内、静脉内或腹膜内给予患者。在另一实施方案中，寡核苷酸以药物组合物给予。治疗方案包括将反义化合物给予患者至少一次；然而，该治疗可修改为在一段时间内包括多个剂量。该治疗可与一种或多种其它类型的治疗联合。在另一实施方案中，将寡核苷酸包封在脂质体中，或与载体分子(例如胆固醇、TAT肽)连接。下文阐述其它方面。附图简述图1是实时PCR结果图，其显示在用Lipofectamine2000引入的硫代磷酸酯寡核苷酸治疗HepG2细胞后与对照相比的ADIPOQ1mRNA的倍数变化+标准差。实时PCR结果表明，在用设计为ADIPOQ反义物AA515150的一种寡核苷酸和设计为BC036509的一种寡核苷酸治疗后48小时，显著提高HepG2细胞中的ADIPOQmRNA水平。表示为CUR-1023至CUR-1029的条块分别对应用SEQIDNO:7-13治疗的样品。图2是实时PCR结果图，其显示在用Lipofectamine2000引入的硫代磷酸酯寡核苷酸治疗HepG2细胞后与对照相比的ADIPOQ1mRNA的倍数变化+标准差。实时PCR结果表明，在用设计为ADIPOQ反义物AA515150的两种寡核苷酸(CUR-1107和1108)和设计为BC036509的一种寡核苷酸(CUR-1110)治疗后48小时，显著提高HepG2细胞中的ADIPOQmRNA水平。表示为CUR-1107、CUR-1108、CUR-1106、CUR-1110和CUR-1109的条块分别对应用SEQIDNO:14-18治疗的样品。图3是实时PCR结果图，其显示在用Lipofectamine2000引入的硫代磷酸酯寡核苷酸治疗Vero细胞后与对照相比ADIPOQ1mRNA的倍数变化+标准差。实时PCR结果表明，在用设计为ADIPOQ反义物AA515150的一种寡核苷酸(CUR-1107)和设计为BC036509的一种寡核苷酸(CUR-1110)治疗后48小时，显著提高Vero细胞中的ADIPOQmRNA水平。表示为CUR-1107、CUR-1108、CUR-1106、CUR-1110和CUR-1109的条块分别对应用SEQIDNO:14-18治疗的样品。图4是实时PCR结果图，其显示在用Lipofectamine2000引入的硫代磷酸酯寡核苷酸治疗HepG2细胞后与对照相比ADIPOQ1mRNA的倍数变化+标准差。实时PCR结果表明，在用设计为ADIPOQ反义物AA515150的两种寡核苷酸治疗后48小时，显著提高HepG2细胞中的ADIPOQmRNA水平。表示为CUR-1167至CUR-1171的条块分别对应用SEQIDNO:19-23治疗的样品。图5是实时PCR结果图，其显示在用Lipofectamine2000引入的硫代磷酸酯寡核苷酸治疗HepG2细胞后与对照相比ADIPOQ1mRNA的倍数变化+标准差。实时PCR结果表明，在用设计为ADIPOR2反义物Skerblarbu.aAprADIPOR2的寡核苷酸之一治疗后48小时，显著提高HepG2细胞中的ADIPOR2mRNA水平。表示为CUR-1068至CUR-1071以及CUR-1078至CUR-1081的条块分别对应用SEQIDNO:24-31治疗的样品。图6显示与Rhesus基因组比对的天然反义序列AA515150，其中设计为AA515150的寡核苷酸位置突出显示。图7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于在调节患者细胞或组织中的脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸的功能和/或表达中使用的、5‑30个核苷酸长度且与脂连蛋白(ADIPOQ)多核苷酸的天然反义物的反向互补序列具有至少50%的序列同一性的反义寡核苷酸，其中所述使用包括使所述细胞或组织与所述反义寡核苷酸接触。

【技术特征摘要】
2009.08.11 US 61/232917;2009.10.20 US 61/2531871.一种用于上调患者细胞或组织中的脂连蛋白多核苷酸的功能和/或表达中使用的、10-30个核苷酸长度且与脂连蛋白多核苷酸的天然反义物的反向互补序列具有至少90％的序列同一性的反义寡核苷酸，所述使用包括使所述细胞或组织与所述反义寡核苷酸接触，其中所述反义寡核苷酸为SEQIDNO：9、11、13-15、17、19、23或25所示的核酸序列。2.权利要求1的反义寡核苷酸，其中所述使用是用于预防或治疗脂连蛋白相关的疾病或病况。3.权利要求1或2的反义寡核苷酸，其中所述脂连蛋白的功能和/或表达被提高至少10％。4.权利要求1或2的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸靶向脂连蛋白多核苷酸的天然反义转录物的区。5.权利要求2的反义寡核苷酸，其中所述疾病或病况选自：癌症、炎症、动脉粥样硬化、神经系统疾病或障碍、心脏疾病或障碍、自身免疫疾病或障碍、由病原体引起的感染性疾病或障碍或病况、免疫缺陷疾病或障碍、变态反应、代谢疾病或障碍、肝病、肾病、蛋白尿和细胞增殖障碍。6.权利要求5的反义寡核苷酸，其中所述病原体为病毒、细菌、真菌或原生动物。7.权利要求5的反义寡核苷酸，其中所述代谢疾病或障碍为糖尿病、糖尿病性神经病、肥胖症、胰岛素抵抗、代谢综合征、高血压、与胰岛素敏感性调节受损相关的疾病或障碍、或异常血糖水平。8.权利要求7的反义寡核苷酸，其中所述代谢综合征是与胰岛素抵抗相关的代谢综合征。9.权利要求7的反义寡核苷酸，其中所述异常血糖水平是高血糖。10.一种体外上调患者细胞或组织中脂连蛋白多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括：将所述细胞或组织与10-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述反义寡核苷酸与脂连蛋白多核苷酸的天然反义物的反向互补序列具有至少90％的序列同一性并且特异地靶向脂连蛋白多核苷酸的天然反...

【专利技术属性】
技术研发人员：J科拉德，O霍尔科瓦谢尔曼，
申请(专利权)人：库尔纳公司，
类型：发明
国别省市：美国;US