microRNA302s在制备抗肿瘤药物中的用途制造技术

技术编号:10953535 阅读:173 留言:0更新日期:2015-01-23 14:54
本发明专利技术公开了SEQ ID NO.1~5所示的核苷酸序列,包含该序列的质粒和重组慢病毒,以及前述序列、质粒、慢病毒制备抗肿瘤药物的用途。本发明专利技术还公开了一种肿瘤筛查试剂盒,它包括检测细胞microRNA302a表达水平的试剂。本发明专利技术microRNA302s可以有效诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤增长,有较强的实际应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及microRNA302s的新用途。
技术介绍
microRNAs (miRNAs)是人类新发现的一类非编码小分子RNA,广泛分布于真核细 胞内。miRNAs通过与靶基因互补位点配对结合,在转录后水平负性调控靶基因的表达,参 与生长发育、细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化等生命过程。成熟的miRNAs长17?24bp,一 个miRNA分子能够调控多种基因。因而有研究发现,相对于编码蛋白质的mRNA分子来说, 一些基因的表达更依赖于miRNAs的调控水平。 microRNA302s,即 miR-302 家族 microRNA,包括 miR-302a、miR-302b、miR-302c、 miR-302d,成簇聚集在人类4号染色体上,是胚胎干细胞特异性表达的miRNAs。目前,关于 miR-302家族microRNA,研究均集中在于胚胎发育相关的基因上,比如,研究发现,miR-302 家族的每个成员都能同时调节大约445个基因,并且他们所调节的大部分基因都是相同 的,这些基因的大多涉及早期胚胎发育相关的信号分子或影响细胞分化的细胞因子,转入 miR-302s后可以抑制这些基因的作用,进而抑制组织细胞的分化,有可能把细胞重编程为 胚胎干细胞样的状态。
技术实现思路
本专利技术提供了 miR-302家族microRNA在制备抗肿瘤药物中的新用途。 首先,本专利技术提供了 SEQ ID NO. 1?5所示的核苷酸序列。 SEQ ID NO. 1 ?4 所示的核苷酸序列分别为 miR-302a、miR-302b、miR-302c、 miR-302d,SEQ ID 勵.5所示的核苷酸序列为111丨1?-3023、111丨1?-30213、111丨1?-302(3和111丨1?-302(1 串联后的基因序列:miR-302s。 miR-302a: CCACCACUUAAACGUGGAUGUACUUGCUUUGAAACUMAGAAGUAAGUGCUUCCAUGUUU UG⑶GAUGG ; miR-302b:GCUCCCUUCAACUUUAACAUGGAAGUGCUUUCUGUGACUUUAAAAGUAAGUGCUUCCAUG UUUUAGUAGGAGU ; miR-302c:CCUUUGCUUUAACAUGGGGGUACCUGCUGUGUGAAACAAAAGUAAGUGCUUCCAUGUUUC AGUGGAGG ; miR-302d:CCUCUACUUUAACAUGGAGGCACUUGCUGUGACAUGACAAAAAUAAGUGCUUCCAUGUUU GAGUGUGG〇 miR-302s (SEQ ID NO. 5): CCACCACTTAAACGTGGATGTACTTGCTTTGAAACTAAAGAAGTAAGTGCTTCCATGTTTTGGTGATGG AGATCTGCTCCCTTCAACTTTAACATGGAAGTGCTTTCTGTGACTTTAAAAGTAAGTGCTTCCATGTTTTAGTAGGA GTCATATGCCTTTGCTTTAACATGGGGGTACCTGCTGTGTGAAACAAAAGTAAGTGCTTCCATGTTTCAGTGGAGGT CTAGACCTCTACTTTAACATGGAGGCACTTGCTGTGACATGACAAAAATAAGTGCTTCCATGTTTGAGTGTGG 本专利技术还提供了 SEQ ID NO. 1?5所示的核苷酸序列中的任意一个或任意多个序 列在制备抗肿瘤药物中的用途。所述抗肿瘤药物是抗神经瘤药物。所述抗神经瘤药物是抗 神经母细胞瘤药物。 本专利技术还提供了一种重组质粒,它包括SEQ ID NO. 1?5任意一项所示的核苷酸 序列。优选地,所述重组质粒是重组GV266质粒。 本专利技术还提供了所述重组质粒在制备治疗抗肿瘤药物中的用途。优选地,所述抗 肿瘤药物是抗神经瘤药物。进一步优选地,所述抗神经瘤药物是抗神经母细胞瘤药物。 本专利技术重组慢病毒,它包括SEQ ID NO. 1?5任意一项所示的核苷酸序列。 本专利技术重组慢病毒,它包括前述重组质粒。 本专利技术还提供了所述重组慢病毒在制备治疗抗肿瘤药物中的用途。优选地,所述 抗肿瘤药物是抗神经瘤药物。进一步优选地,所述抗神经瘤药物是抗神经母细胞瘤药物。 本专利技术肿瘤细胞筛查试剂盒,它包括检测细胞micr〇RNA302a表达水平的试剂。 优选地,所述抗肿瘤药物是抗神经瘤药物。进一步优选地,所述抗神经瘤药物是抗 神经母细胞瘤药物。 本专利技术提供的SEQ ID NO. 1?5所示的核苷酸序列,可以诱导肿瘤细胞凋亡,抑制 肿瘤细胞的生长,可用于制备抗肿瘤药物,本专利技术肿瘤细胞筛查试剂盒可以有效筛查待检 细胞是否为肿瘤细胞,具有良好的临床应用前景。 显然,根据本专利技术的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离 本专利技术上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。 以下通过实施例形式的【具体实施方式】,对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容 所实现的技术均属于本专利技术的范围。 【附图说明】 图lmiR_302a在293细胞和SK细胞中的表达情况比较 图2目的基因真核表达载体构建流程图 图3载体图谱 图 4Marker 自上而下依次为:5kb,3kb,2kb,I. 5kb,1Kb,750bp,500bp,250bp, 100bp,2# :酶切的目的基因质粒; 图5电泳图说明:1# :阴性对照(ddH20) ;2# :阴性对照(空载自连对照组);3# : 阳性对照(GAPDH) ;4#:Marker 自上而下依次为 5kb,3kb,2kb,1.5kb,lKb,750bp,500bp, 250bp,IOObp ;5#-12# :hsa-mir-302, a, b, c, d 串联 1-8 号转化子。 图6测序图谱,图6-1为第1?295bp的测序图谱;图6-2为第296?601bp的测 序图谱;图6-3为第602?807bp的测序图谱;图6-4为第808?1081bp的测度图谱;图 6-5为第1081?1159bp的测序谱图。 图7病毒感染图片(IEIuLIOOx b) 图8病毒感染图片(IEIuLIOOx g) 图9病毒感染图片(IEIuLIOOx r) 图10病毒感染图片(1E1uL200x b) 图11病毒感染图片(1E1uL400x b) 图12定量PCR实验结果 图13Real_time PCR检测慢病毒转染后miR_302s表达情况 图14miR_302a在SK-目的病毒转染细胞和SK-目对照细胞的表达情况 图15miR_302b在SK-目的病毒转染细胞和SK-目对照细胞的表达情况 图16miR-302c在SK-目的病毒转染细胞和SK-目对照细胞的表达情况 图17miR-302d在SK-目的病毒转染细胞和SK-目对照细胞的表达情况 图18SK本文档来自技高网...

【技术保护点】
SEQ ID NO.1~5所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
2013.06.28 CN 201310268103.11. SEQ ID NO. 1?5所示的核苷酸序列。 2. SEQ ID NO. 1?5所示的核苷酸序列中的任意一个或任意多个序列在制备抗肿瘤药 物中的用途。3. 根据权利要求2所述的用途,其特征在于:所述抗肿瘤药物是抗神经瘤药物。4. 根据权利要求3所述的用途,其特征在于:所述抗神经瘤药物是抗神经母细胞瘤药 物。5. -种重组质粒,其特征在于:它包括SEQ ID NO. 1?5任意一项所示的核苷酸序列。6. 根据权利要求5所述的重组质粒,其特征在于:它是重组GV266质粒。7. -种重组慢病毒,...

【专利技术属性】
技术研发人员:李园王奕李艺波陈珂玲周斌周总光
申请(专利权)人:四川大学华西医院
类型:发明
国别省市:四川;51

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