一种溶血剂及其应用和白细胞分类计数方法技术

本发明专利技术涉及医学检验技术领域，公开了一种溶血剂及其应用和白细胞分类计数方法。本发明专利技术所述溶血剂包含一种或两种以上阳离子表面活性剂、一种或两种以上小分子醇、一种或两种以上缓冲液、一种或两种以上可溶性无机盐，余量为水。本发明专利技术简化溶血剂的组分，采用相适宜、易获取的原料制备出适合对嗜碱性粒细胞和其他白细胞的分类计数的新型溶血剂，相比当下组分较为复杂的溶血剂产品使用更加方便快捷，溶血时间仅需要5-20s，无需特殊温度要求即可配合电阻抗法测量仪器对嗜碱性粒细胞和其他白细胞的分类计数，准确度较高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学检验
，具体涉及一种溶血剂及其应用和白细胞分类计数方法。
技术介绍
白细胞亦称白血球，血液细胞成分之一，为无色圆形细胞，比红细胞略大，有细胞核。可分为嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞五种。在机体发生炎症或疾病时，白细胞数往往发生变化，故白细胞分析是医学实验室血液检验中最常采用的检测项目之一。白细胞计数和分类不仅对疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后分析均有重要意义，而且对健康状态的评估也有一定的价值。白细胞中的嗜碱性粒细胞大小约为10～15um，呈圆形或椭圆形，细胞核与细胞质之比约为1：2～1：3，细胞核分叶状，常被颗粒覆盖，核染色质聚集，无核仁，细胞质含粗大、致密、深紫色或黑色颗粒，在健康人体血液中嗜碱性粒细胞大约占白细胞总数的0.5～1％，嗜碱性粒细胞增多见于慢性粒细胞白血病、何杰金氏病、癌转移、铅铋中毒等。采用瑞氏试剂对样品染色并进行人工镜检是白细胞五分类计数的“金标准”，但是随着人们对临床检测要求的不断提高，这种耗时、繁琐的标准方法越来越不适应如今的临床检测。随着医学血液学的发展,各种类型的血细胞分析仪配合专用试剂(如溶血剂等)的检测方法在国内得到了广泛的应用,这些全自动的仪器先通过专用试剂处理红细胞(RBC)，然后采用流式技术或电阻抗的计数原理，通过获取白细胞不同细胞器发射出的荧光信息和散射光信息将白细胞分成不同种类。然而，由于不同类的白细胞的体积可能差别不大，电阻抗原理这种方法只是将白细胞简单分类成淋巴细胞，单核细胞和粒细胞，并不能将嗜碱性粒细胞区分和计数。也有的仪器使用的是光散射原理，比如专利US3740143，使用光学方法可以将淋巴细胞、单核细胞，中性粒细胞，嗜酸性粒细胞区分和计数，但由于嗜碱性粒细胞数量较少，这种方法也不能很好的检测到嗜碱性粒细胞。现有技术中公开了多种用于白细胞分类的试剂，如CN2011100744709涉及一种用于白细胞五分类计数的溶血剂及用途。所述溶血剂由溶血剂A与溶血剂B组成。溶血剂A由聚氧乙烯型非离子表明活性剂、有机酸、季铵盐阳离子表面活性剂助溶剂、稳定剂和渗透压调节剂组成；溶血剂B由碱性无机盐和渗透压调节剂组成。该溶血剂能够将白细胞分为淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和嗜碱性粒细胞，获得各类白细胞数量。虽然上述专利记载的技术方案可以有效区分各类白细胞，但是对于仅需要区分嗜碱性粒细胞和其他白细胞来说，其所采用的溶血剂配方较为复杂繁琐，组分较多，而且使用上也需要按照一定的操作步骤来，简便性较差。US5196346(Didier Lefevre)公开了一种测量白细胞和嗜碱性粒细胞的溶血剂，该溶血剂使用非离子型表面活性剂Brij35和阴离子型表面活性剂，但这种溶血剂对使用温度要求高，溶血速度慢，且原料来源较为繁琐，在使用上仍然不够简便。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于白细胞分类计数的溶血剂，使得该溶血剂的溶血速度快、组分较少，使用方便，能够正确区分嗜碱性粒细胞和其他白细胞。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种溶血剂，包含：一种或两种以上阳离子表面活性剂、一种或两种以上小分子醇、一种或两种以上缓冲液、一种或两种以上可溶性无机盐，余量为水。本专利技术针对目前配方较为复杂的各种溶血剂，选择适宜的组分组合使用，研制出一种新型的可用于准确区分嗜碱性粒细胞和其他白细胞的溶血剂，使用方便并且溶血速度较快，弥补了现有溶血剂的缺陷。其中，作为优选，所述溶血剂pH值为1.5-4.5，包含浓度为0.1g/L-100g/L的一种或两种以上阳离子表面活性剂、浓度为0.01g/L-50g/L的一种或两种以上小分子醇、浓度为0.001mol/L-1mol/L的一种或两种以上缓冲液、浓度不大于30g/L的一种或两种以上可溶性无机盐。余量为水。更优选地，所述溶血剂pH值为2-3，包含浓度为1g/L-20g/L的一种或两种以上阳离子表面活性剂、浓度为1g/L-20g/L的一种或两种以上小分子醇、浓度为5mmol/L–200mmol/L的一种或两种以上缓冲液、浓度不大于20g/L的一种或两种以上可溶性无机盐。作为优选，本专利技术溶血剂中所述阳离子表面活性剂选自季铵盐表面活性剂或/和吡啶季铵盐表面活性剂；进一步，最优选地，所述季铵盐表面活性剂选自十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵，十四烷基三甲基氯化铵，十四烷基三甲基溴化铵，十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵，所述吡啶季铵盐表面活性剂选自十二烷基吡啶氯化铵，十二烷基吡啶溴化铵。作为优选，所述小分子醇选自甲醇、乙醇、异丙醇、苯氧甲醇。作为优选，所述缓冲液选自苹果酸、丁二酸、邻苯二甲酸、柠檬酸、酒石酸、草酸、甲酸、马来酸、甘胺酸及它们各自的盐，以及盐酸、硫酸、磷酸、硝酸。本专利技术所述缓冲液浓度还可以根据所述溶血剂的pH值加以确定。作为优选，所述可溶性无机盐选自硫酸钠、硫酸钾、氯化钠、氯化钾。本专利技术还提供一种嗜碱性粒细胞和其他白细胞的分类计数方法，包括：待测血液和本专利技术所述溶血剂以体积比1:500-1:100混合于电阻抗原理血液分析仪的计数池中，反应温度30～40℃，溶血时间为5-20秒，然后将处理好的待测血液样品依次通过宝石计数孔，通过检测电压的变化，获得嗜碱性粒细胞和其他白细胞数量。采用本溶血剂后，红细胞发生溶解，嗜碱性粒细胞不发生收缩，其他白细胞出现“裸核化”，示意图见图1。采用本专利技术所述溶血剂对待测血样进行白细胞分类计数，通过电阻抗原理血液分析仪检测后，所获得的嗜碱性粒细胞总数和其他白细胞总数与光学法测定的数据没有明显差别，结果准确度较高。由此，本专利技术还提供了本专利技术所述溶血剂在白细胞计数和分类中的应用以及在制备白细胞计数和分类产品中的应用。作为优选，所述白细胞计数和分类为对嗜碱性粒细胞和其他白细胞的分类计数。由以上技术方案可知，本专利技术简化溶血剂的组分，采用相适宜、易获取的原料制备出适合对嗜碱性粒细胞和其他白细胞的分类计数的新型溶血剂，相比当下组分较为复杂的溶血剂产品使用更加方便快捷，溶血时间仅需要5-20s，无需特殊温度要求即可配合电阻抗法测量仪器对嗜碱性粒细胞和其他白细胞的分类计数，准确度较高。附图说明图1所示为采用本专利技术溶血剂后红细胞、其他白细胞以及嗜碱性粒细胞的形态示意图。...

【技术保护点】
一种溶血剂，其特征在于，包含：一种或两种以上阳离子表面活性剂、一种或两种以上小分子醇、一种或两种以上缓冲液、一种或两种以上可溶性无机盐，余量为水。

【技术特征摘要】
1.一种溶血剂，其特征在于，包含：
一种或两种以上阳离子表面活性剂、一种或两种以上小分子醇、一种或
两种以上缓冲液、一种或两种以上可溶性无机盐，余量为水。
2.根据权利要求1所述溶血剂，其特征在于，pH值为1.5-4.5，包含浓
度为0.1g/L-100g/L的一种或两种以上阳离子表面活性剂、浓度为
0.01g/L-50g/L的一种或两种以上小分子醇、浓度为0.001mol/L-1mol/L的一种
或两种以上缓冲液、浓度不大于30g/L的一种或两种以上可溶性无机盐，余量
为水。
3.根据权利要求1或2所述溶血剂，其特征在于，所述阳离子表面活性
剂选自季铵盐表面活性剂或/和吡啶季铵盐表面活性剂。
4.根据权利要求3所述溶血剂，其特征在于，所述季铵盐表面活性剂选
自十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵，十四烷基三甲基氯化铵，
十四烷基三甲基溴化铵，十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵。
5.根据权利要求3所述溶血剂，其特征在于，所述吡啶季铵盐表...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯剑军，朱漩，蒋玉林，
申请(专利权)人：深圳市开立科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44