胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂的联合应用制造技术

胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂联合用于制备在肝切除术后促进肝再生的药物中的用途。在进行肝切除术后联合给予胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂，具有明显的促进肝再生作用，减轻肝小叶内肿胀和空泡变性的肝细胞数量，进而促进肝功能的恢复，且无明显毒副作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂联合用于制备促进肝再生的药物中的用途。 
技术介绍
复杂的大范围肝切除术等易出现肝细胞损害、小肝综合症、肝功能衰竭等并发症，严重时可导致患者死亡。这些并发症在术前伴有阻塞性黄疸和肝硬化的患者中发生率较高。 肝细胞再生能补偿手术切除和肝组织损伤导致的肝细胞减少，恢复肝脏的生理功能，对防治小肝综合症、肝功能衰竭等有非常重要的作用。 胆碱酯酶抑制剂是一类能与胆碱酯酶(ChE)结合，并抑制胆碱酯酶活性的药物，其作用是使胆碱能神经末梢释放的Ach堆积，表现M样及N样作用增强而发挥兴奋胆碱受体的作用。 毒蕈碱型受体阻断剂能阻断节后胆碱能神经所支配的效应器细胞上的毒蕈碱型受体，具有松弛内脏平滑肌、解除平滑肌痉挛、抑制唾液腺、汗腺、胃肠腺等的分泌、解除迷走神经对心脏的抑制、松弛虹膜刮约肌、兴奋呼吸中枢等作用。 专利文献CN102580099A报道了毒蕈碱受体阻断剂和胆碱酯酶抑制剂用于抗肝脏缺血再灌注损伤的用途。 迄今为止，没有关于毒蕈碱受体阻断剂和胆碱酯酶抑制剂联用促进肝再生的报道。 
技术实现思路
本专利技术人发现，胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂联合应用能够促进肝的再生，特别是在大范围肝切除术后能够促进肝的再生，减轻肝小叶内肿胀和空泡变性的肝细胞数量，促进肝功能的恢复，且无明显毒副作用。 鉴于此，本专利技术提供胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂联合用于制备促进肝再生的药物中的用途，特别是用于制备在肝切除术后促进肝再生的药物中的用途。 >本专利技术进而提供胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂联合用于制备治疗或预防因肝细胞数量不足引起的肝功能障碍的药物中的用途，特别是用于制备治疗或预防肝切除术后因肝细胞数量不足引起的肝功能障碍的药物中的用途。 本专利技术进而提供胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂联合用于制备预防或治疗小肝综合症的药物的用途，特别是用于制备预防或治疗肝切除术后小肝综合症的药物的用途。 所述胆碱酯酶抑制剂优选为选自新斯的明、溴化新斯的明、毒扁豆碱、吡啶斯的明、溴化吡啶斯的明、加兰他敏、依酚氯铵、安贝氯铵、地美溴铵、他克林中的一种或多种。更优选为新斯的明。 所述毒蕈碱受体阻断剂优选为选自山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品、后马托品、托吡卡胺或普鲁本辛中的一种或多种。更优选为山莨菪碱。 在本专利技术的用途中，胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂的重量比例优选为1:50-800，更优选为1:200-600，最优选为1:500。 本专利技术的药物可以是胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂混合的药物，也可以是胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂分装的药物。 本专利技术中所述药物可以是胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂与药学上可接受的载体组成的任何合适的剂型。例如，可以列举片剂、胶囊、软胶囊、口服液、颗粒剂、悬浮剂、丸剂、滴丸剂、静脉注射液、皮下注射液等。本专利技术的制剂可以是缓释制剂。 本专利技术的用途在针对人体给药时，胆碱酯酶抑制剂(优选新斯的明)的给药剂量为1.25～60μg/kg，优选为1.7-15μg/kg，更优选为4μg/kg。毒蕈碱受体阻断剂(优选山莨菪碱)的给药剂量为1mg-3mg/kg，优选为1.7mg-2.3mg/kg，更优选为2mg/kg。 附图说明图1显示治疗组和对照组中梗阻性黄疸肝切除大鼠的肝再生率。 图2显示治疗组和对照组中肝脏增生指数检测结果。 图3显示治疗组和对照组中梗阻性黄疸肝切除余肝的肝细胞Ki-67表达情况。 图4显示治疗组和对照组ICG PDR的检测结果。 图5显示假手术组(图5A)、对照组(图5B)和治疗组(图5C)大鼠的肝脏组织病理学变化。 图6是显示治疗组和对照组中梗阻性黄疸肝切除余肝的肝细胞Ki-67表达情况。 图7显示假手术组、对照组和治疗组大鼠的肝脏组织病理学变化。 具体实施方式实验动物与试剂 雄性Wistar大鼠，体重240～260g，由军事医学科学院实验动物中心提供。 实验用药为甲硫酸新斯的明注射液(上海信宜金朱药业有限公司)和盐 酸消旋山莨菪碱注射液(天津金耀氨基酸有限公司)。 阻塞性黄疸模型的制作 大鼠术前12小时禁食，不禁水。该手术方法是在使用外科手术显微镜及乙醚麻醉下进行。麻醉成功后，将大鼠仰卧位固定，腹部皮肤碘伏消毒，取上腹正中切口，游离胆总管，用5-0丝线远、近端双重结扎后中间剪断，以防止胆管再通，然后关腹。 胆道引流和部分肝切除 胆管结扎七天后，乙醚麻醉下进行第二次开腹手术。胆道引流是通过插入一段8毫米长的由无菌血管内导管(上海浦东金环医疗有限公司，中国，上海)制作的支架重新连接近端和远端胆总管，在用荷包缝合将支架进行适当固定。然后参照文献方法(Higgins GM,Anderson RM.Experimental pathology of liver resection.Arch Pathol.1931；12:186-197)进行68％肝切除，并立即将切除的肝叶进行称重以计算总的肝脏重量。 药物处理和样品收集 将阻塞性黄疸1周的大鼠进行胆道引流和部分肝切除后随机分为两组：联合山莨菪碱和新斯的明组(治疗组)和生理盐水组(对照组)，每组6只大鼠。山莨菪碱以25mg/kg、新斯的明以50μg/kg混合后腹腔注射给药。在肝切除后立即开始给药并持续两天，每天给药两次。对照组大鼠注射等量生理盐水。另外设假手术组大鼠6只。 在二次手术48小时后将大鼠乙醚麻醉并开腹。取残余再生肝叶进行称重。10％福尔马林-磷酸盐缓冲液(pH7.4)中进行固定，用于组织病理学分析用。 吲哚菁绿(ICG)排泄试验 将ICG(辽宁丹东医疗有限公司生产)按2.5mg/ml溶解于无菌注射用水。测定时首先将新鲜制备的ICG溶液快速注入大鼠一侧股静脉(2.5mg/kg),于 注射后1、3和5分钟时从下腔静脉进行血液采样，每次150-200μl,并加入肝素抗凝。离心后取50μL血浆样品与950μL 1％重量/体积比的牛血清白蛋白和0.9％重量/体积比的NaCl水溶液混合，然后于805nm处进行分光光度计比色。PDR为1、3和5分钟时稀释血浆的OD值的半对数衰减曲线的斜率。 肝再生的评估 肝脏再生的评估的采用两个独立的检测指标：肝脏质量的再生以动物处死时残余再生肝脏重量占肝切除时估计总肝重的百分比表示，并使用以下公式计算：肝再生(％)＝A/B×0.68×100，其中A代表在处死动物时的残余再生肝重量，B代表切除肝脏重量，约占整个肝脏重量的68％。评估肝细胞增殖的Ki-67标记指数利用免疫组织化学方法测定：将福尔马林固定的肝组织进行石蜡包埋、制成5μm厚切片，脱蜡复水后按照说明书要求以小鼠抗Ki-67的单克隆抗体(BD Pharmingen公司)进行免疫组织化学染色，苏木素复染。光学显微镜下随机选取10个高倍视野(400×)，计数Ki-67标记阳性的肝细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂联合用于制备促进肝再生的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断剂联合用于制备促进肝再生的药
物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断
剂联合用于制备在肝切除术后促进肝再生的药物中的用途。
3.根据权利要求1所述的用途，其中胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断
剂联合用于制备治疗或预防因肝细胞数量不足引起的肝功能障碍的药物中
的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其中胆碱酯酶抑制剂和毒蕈碱受体阻断
剂联合用于制备治疗或预防肝切除术后因肝细胞数量不足引起的肝功能障
碍的药物中的用途。
5.根据权利要求1所述的用...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾万清，
申请(专利权)人：顾万清，
类型：发明
国别省市：北京;11