乳制品中植物甾醇的定量检测方法技术

本发明专利技术涉及乳制品中植物甾醇的定量检测方法，该方法可同时检测原料及乳制品中植物甾醇所含有的β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇的具体含量。通过对样品的处理方法，皂化条件、萃取剂及色谱柱的作用条件等进行优化，确立检测条件，建立检测方法。该方法简便、快速、准确，适合于基层推广应用。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及，该方法可同时检测原料及乳制品中植物甾醇所含有的β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇的具体含量。通过对样品的处理方法，皂化条件、萃取剂及色谱柱的作用条件等进行优化，确立检测条件，建立检测方法。该方法简便、快速、准确，适合于基层推广应用。【专利说明】
本专利技术属于分析化学领域，具体地说，涉及一种乳制品中植物留醇的定量检测方 法。
技术介绍
植物留醇是国家卫生部2010年第3号公告批准的新资源食品，是利用大豆油等植 物油馏分或塔罗油为原料，通过皂化、萃取、结晶等工艺得到，然后将植物留醇和葵花籽油 脂肪酸进行酯化生产得到植物留醇酯。 植物留醇存在于天然的蔬菜、水果、豆类、坚果和谷物中，是植物细胞膜的组成成 分，植物留醇能降低血中胆固醇浓度。这是因为植物留醇的化学结构与胆固醇极其类似，可 作竞争性抑制肠内胆固醇的水解，并在肠粘膜上皮细胞内抑制游离胆固醇的再酯化，以及 能竞争性地占据肠内胆固醇的位置，减少胆固醇与肠粘膜细胞的接触机会，从而阻碍小肠 对胆固醇的吸收，使其直接从粪便中排出。植物留醇中所含有的成分最常见的包括谷 甾醇、菜油留醇、豆留醇，其次是植物留醇的饱和形式，S卩β_谷留烷醇和菜油留烷醇等。近 年来，国内外对植物留醇的检测方法，主要有高效液相色谱法、气相色谱法和气相色谱/质 谱法。我国目前尚没有乳制品中植物留醇的检测方法标准。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种乳制品中植物留醇的定量检测方法。 为了实现本专利技术目的，本专利技术的一种乳制品中植物留醇的定量检测方法，包括以 下步骤： 1)样品的处理：向0.卜1. 5克样品中加入0. 667g/mL氢氧化钾溶液5-10mL和95% 乙醇5-30mL，摇动使样品溶解，于70-100°C皂化l_4h ;然后加入有机溶剂萃取2-3次，合 并有机相，用蒸馏水洗涤至中性；然后用无水硫酸钠脱水后，用旋转蒸发器蒸发至干，用正 已烷分次(优选3次）将其转入10mL容量瓶中定容，即得试样；所述有机溶剂为正已烷、石 油醚或乙醚等； 2)标准溶液的配制：标准储备液的浓度为1. Omg/mL，标准工作液的浓度为50 μ g/ mL ； 3)色谱分析：采用规格为30mX0. 25mmX0. 25μπι的毛细管色谱柱Elite-1、规格 为 30mX0. 32mmX0. 25μπι 的毛细管色谱柱 Elite-5 或规格为 30mX0. 25mmX0. 25μπι 的毛 细管色谱柱Elite-35 ; 色谱条件：进样口温度270-320°C;检测器温度270-3KTC;程序升温180-290°C;载 气为氮气，流速2mL/min ;氢气流速40_45mL/min ;空气流速400-450mL/min ;进样量2 μ L ; 分流比10:1 ; 4)标准曲线的绘制：将植物留醇标准溶液进样后，以标样浓度对峰面积作标准曲 线. -^4 ， 5)试样中植物留醇含量的测定：将试样进样，根据样品的峰面积，代入公式（I)， 计算得出试样中植物留醇的含量； 【权利要求】1. 乳制品中植物留醇的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 样品的处理：向0. 1-1. 5克样品中加入0. 667g/mL氢氧化钾溶液5-10mL和95%乙 醇5-30mL，摇动使样品溶解，于70-10(TC皂化l_4h ;然后加入有机溶剂萃取2-3次，合并有 机相，用蒸馏水洗涤至中性；然后用无水硫酸钠脱水后，用旋转蒸发器蒸发至干，用正已烷 分次将其转入10mL容量瓶中定容，即得试样；所述有机溶剂为正已烷、石油醚或乙醚； 2) 标准溶液的配制：标准储备液的浓度为1. Omg/mL，标准工作液的浓度为50μ g/mL ; 3) 色谱分析：采用规格为30mX0. 25mmX0. 25μπι的毛细管色谱柱Elite-1、规格为 30mX0. 32mmX0. 25μπι 的毛细管色谱柱 Elite-5 或规格为 30mX0. 25mmX0. 25μπι 的毛细 管色谱柱Elite-35 ; 色谱条件：进样口温度270-320°C ;检测器温度270-3KTC ;程序升温180-290°C ;载气 为氮气，流速2mL/min ;氢气流速4〇-45mL/min ;空气流速400-450mL/min ;进样量2 μ L ;分 流比10:1 ; 4) 标准曲线的绘制：将植物留醇标准溶液进样后，以标样浓度对峰面积作标准曲线； 5) 试样中植物留醇含量的测定：将试样进样，根据样品的峰面积，代入公式（I)，计算 得出试样中植物留醇的含量； A.xcx Vx 100 Χι =- (I) Α ν χ m χ 1000 式中： Xi--试样中植物甾醇的含量； K--试样中植物甾醇的峰面积； As--植物甾醇标准工作液的峰面积； c--植物留醇标准工作液浓度； V--试样的定容体积； m--试样的质量。2. 根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，所述植物留醇为β_谷留醇、菜 油甾醇、豆甾醇中的一种或多种。3. 根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，步骤1)中样品处理为：向 0. 2-1. 2克样品中加入0. 667g/mL氢氧化钾溶液5-8mL和95%乙醇10-20mL，摇动使样品溶 解，于80-KKTC皂化l_3h ;然后加入正已烷萃取2-3次。4. 根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，步骤1)中样品处理为：向 0. 3-1. 0克样品中加入0. 667g/mL氢氧化钾溶液6-9mL和95%乙醇15-25mL，摇动使样品溶 解，于70-KKTC皂化l_4h ;然后加入石油醚萃取2-3次。5. 根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，步骤3)中采用规格为 30mX0. 25mmX0. 25μπι的毛细管色谱柱Elite-Ι进行色谱分析；色谱条件：进样口温度 300°C ;检测器温度300°C ;程序升温：210°C保持lmin，15°C /min升至285°C，保持6min。 载气为氮气，流速2mL/min ;氢气流速40mL/min ;空气流速400mL/min ;进样量2μ L ;分流比 10:1。6. 根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，步骤3)中采用规格为 30mX0. 32mmX0. 25 μ m的毛细管色谱柱Elite-5进行色谱分析；色谱条件：进样口温度 310°C ;检测器温度300°C ;程序升温：210°C保持lmin，15°C /min升至285°C，保持6min。 载气为氮气，流速2mL/min ;氢气流速45mL/min ;空气流速450mL/min ;进样量2μ L ;分流比 10:1。7.根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，步骤3)中采用规格为 30mX0. 25mmX0. 25 μ m的毛细管色谱柱Elite-35进行色谱分析；色谱条件：进样口温度 310°C ;检测器温度300°C ;程序升温：210°C保持lmin，15°C /min升至285°C，保持14min。 载气为氮气，流速2mL/min ;氢气流速45mL/min ;空气流速4本文档来自技高网...

【技术保护点】
乳制品中植物甾醇的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）样品的处理：向0.1‑1.5克样品中加入0.667g/mL氢氧化钾溶液5‑10mL和95%乙醇5‑30mL，摇动使样品溶解，于70‑100℃皂化1‑4h；然后加入有机溶剂萃取2‑3次，合并有机相，用蒸馏水洗涤至中性；然后用无水硫酸钠脱水后，用旋转蒸发器蒸发至干，用正已烷分次将其转入10mL容量瓶中定容，即得试样；所述有机溶剂为正已烷、石油醚或乙醚；2）标准溶液的配制：标准储备液的浓度为1.0mg/mL，标准工作液的浓度为50μg/mL；3）色谱分析：采用规格为30m×0.25mm×0.25μm的毛细管色谱柱Elite‑1、规格为30m×0.32mm×0.25μm的毛细管色谱柱Elite‑5或规格为30m×0.25mm×0.25μm的毛细管色谱柱Elite‑35；色谱条件：进样口温度270‑320℃；检测器温度270‑310℃；程序升温180‑290℃；载气为氮气，流速2mL/min；氢气流速40‑45mL/min；空气流速400‑450mL/min；进样量2μL；分流比10:1；4）标准曲线的绘制：将植物甾醇标准溶液进样后，以标样浓度对峰面积作标准曲线；5）试样中植物甾醇含量的测定：将试样进样，根据样品的峰面积，代入公式（I），计算得出试样中植物甾醇的含量；Xi=Ai×c×V×100As×m×1000]]>    （I）式中：Xi——试样中植物甾醇的含量；Ai——试样中植物甾醇的峰面积；AS——植物甾醇标准工作液的峰面积；c——植物甾醇标准工作液浓度；V——试样的定容体积；m——试样的质量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王青云，王利，杨晓波，齐懿鸣，孙健，
申请(专利权)人：黑龙江省完达山乳业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23