鼠曲草中多酚类化合物单体制备方法技术

本发明专利技术涉及植物中有效成分提取技术领域，具体来说是一种鼠曲草中多酚类化合物单体制备方法，步骤包括(1)鼠曲草过柱产物；(2)上样洗脱；(3)结构测定；本发明专利技术利用HSCCC与制备HPLC联用技术从鼠曲草中制备分离得到6个化合物，该方法简便、高效无毒，适宜化合物的大量制备，并鉴定了其中5个化合物；同时，对化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用进行了研究，为鼠曲草进一步药理研究及质量控制奠定基础；本发明专利技术方法可快速才鼠曲草中提取多酚类化合物单体，方法操作简单，制备的多酚类单体化合物纯度高。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及植物中有效成分提取
，具体来说是一种，步骤包括(1)鼠曲草过柱产物；(2)上样洗脱；(3)结构测定；本专利技术利用HSCCC与制备HPLC联用技术从鼠曲草中制备分离得到6个化合物，该方法简便、高效无毒，适宜化合物的大量制备，并鉴定了其中5个化合物；同时，对化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用进行了研究，为鼠曲草进一步药理研究及质量控制奠定基础；本专利技术方法可快速才鼠曲草中提取多酚类化合物单体，方法操作简单，制备的多酚类单体化合物纯度高。【专利说明】鼠曲草中多齡类化合物单体制备方法
本专利技术涉及植物中有效成分提取
，具体来说是一种鼠曲草中多酷类化合 物单体制备方法。
技术介绍
[000引 鼠曲草（Gnaphalium affine D. Don)为菊科鼠曲草属植物鼠曲草的全草，1977年版 《中华人民共和国药典》一部中就有收载。传统医学认为它具有止咳化姨，巧风除湿，解毒之 功效，主治咳嗽姨多，风湿瘍痛，水肿，赤白带下，痛肿疗疮等症。在墨西哥，鼠曲草属植物常 被用作抗炎药物。现代药理研究进一步表明鼠曲草不仅具有显著的抗炎、抗氧化、抑菌、镇 咳巧姨、保肝等作用，还有杀虫作用，因此具有广泛的开发利用前景。 目前，文献报道的鼠曲草的化学成分主要是黄丽及黄丽巧类成分，而对其他化合 物研究较少，深入研究鼠曲草中化合物种类、分离其单体成分并进行化学结构鉴定及结 构一活性关系是极其必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述技术存在的问题，提供一种鼠曲草中多酷类化合物单体 制备方法。 为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是；一种鼠曲草中多酷类化合物单体制 备方法，步骤为： [000引 （1)新鲜的鼠曲草置于6(TC的烘箱中烘干后粉碎至10?20目，然后粉碎的原料 加入鼠曲草粉末量20?30倍、质量浓度为50?70 %的己醇，在70?8(TC条件下回流提 取0. 5?比，过滤，滤渣重复提取1次，合并提取液并减压浓缩至1?1. 5ml/g，同时用盐酸 调节抑=3,过滤除去沉淀，将滤液W 4BVA流速通过装有DlOl树脂的层析柱，上柱体积为 吸附后静置0.化，用水洗至无色，然后用4?她V质量浓度为60%己醇W 2?4BV/h的流 速洗脱，收集己醇洗脱液，减压浓缩后冷冻干燥，得鼠曲草过柱纯化产物； (2)将正己焼、己酸己醋、无水甲醇、体积浓度为0. 5%的冰己酸水溶液按体积比 为0. 7:3. 5:1:4的比例充分混合，静置分层过夜，将上相与下相分离，超声脱气，将制得的 鼠曲草过柱纯化产物100?120mg用10?20mL下相超声溶解，作为进样溶液；上相溶剂 W 20mL/min的流速注入高速逆流色谱仪，待上相溶剂充满后，在850?9(K)巧m/min的转 速下将下相W 1. 5mL/min的流速粟入高速逆流色谱仪，设温箱温度20?3(TC，待下相流出 时即系统已经平衡，此时将准备好的进样溶液从进样口注入，同时进行图谱采集，检测波长 为280nm，根据峰形手动分段收集流出液，将收集的流出液减压浓缩后冷冻干燥；该溶剂体 系一次分离得到纯度分别为95. 3%、98. 7%、99. 6%、99. 7%的化合物1、化合物2、化合物 3、化合物6，及化合物4、5的混合物，该混合物用少量甲醇溶解后用制备液相色谱进一步分 离，A粟为质量浓度为0. 5%冰醋酸，B粟为色谱甲醇，洗脱梯度为：在60min有机相W 32% 的体积，水相W 68%的体积等度洗脱，流速15ml/min，柱温3(TC，进样量1ml，检测输出波长 328nm，根据峰形收集化合物4、5 ; (3)通过质谱、核磁共振技术对获得的5个化合物进行了结构鉴定，化合物1为 绿原酸，化合物3为3, 5-双咖啡醜基奎宁酸、化合物4为4, 5-双咖啡醜基奎宁酸、化 合物5为3, 4-双咖啡醜基奎宁酸，化合物6为2' ,4,4' -H轻基-6'-甲氧基查尔 丽-4' -0-目-D-葡萄糖巧。 本专利技术中，参照文献方法（GaoH, Kaw油ata J. A-glucosidase inhibition of6-hydroxyflavones. PartS:Synthesis and evaluation of2, 3, 4-trihydroxybenzoyl-containing flavonoid analogs and6-aminoflavones as a -glucosidase inhibitors. Bioorganic&Medicinal Qiemishy. 2005 ;13:1661_1671 ;YE X_P, SONG C-Q, YUAN P,et al. a -glucosidase and a -amylase inhibitory activity of common constituents from traditional Chinese medicine used for diabetes mellitus. Chinese Journal of化化ral Medicines. 2010;8:349-352) W对硝基苯基-a-D-化喃葡萄糖巧为底物测定 化合物对a-葡萄糖巧酶的抑制作用。6个化合物对a-葡萄糖巧酶均有抑制作用，其抑制 活性均与浓度呈正相关，化合物对a -葡萄糖巧酶抑制作用由强到弱为；化合物2〉化合物 6 >化合物1〉化合物3〉化合物5〉化合物4,抑制作用远远大于同等浓度的拜糖平。 本专利技术的有益技术效果是：本专利技术利用服CCC与制备HPLC联用技术从鼠曲草中制 备分离得到6个化合物，该方法简便、高效无毒，适宜化合物的大量制备，并鉴定了其中5个 化合物；同时，对化合物对a -葡萄糖巧酶的抑制作用进行了研究，为鼠曲草进一步药理研 究及质量控制奠定基础； 本专利技术方法可快速才鼠曲草中提取多酷类化合物单体，方法操作简单，制备的多 酷类单体化合物纯度高。 [001引说明书附图 图1鼠曲草提取物HPLC检测图谱； 图2鼠曲草提取物服CCC分离色谱图； 图3鼠曲草中分离组分的HPLC图谱。 【具体实施方式】 下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的 实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本专利技术保护的范围。 实施例1 一种鼠曲草中多酷类化合物单体制备方法，步骤为： (1)新鲜的鼠曲草置于6(TC的烘箱中烘干后粉碎至10目，然后粉碎的原料加入鼠 曲草粉末量20倍、质量浓度为50%的己醇，在7(TC条件下回流提取0.化，过滤，滤渣重复 提取1次，合并提取液并减压浓缩至无己醇味，同时用盐酸调节抑=3,过滤除去沉淀，将 滤液W 4BVA流速通过装有DlOl树脂的层析柱，上柱体积为吸附后静置0.化，用水洗至无 色，然后用4BV质量浓度为60%己醇W 2BV/h的流速洗脱，收集己醇洗脱液，减压浓缩后冷 冻干燥，得鼠曲草过柱纯化产物； (2)将正己焼、己酸己醋、甲醇、体本文档来自技高网...

【技术保护点】
鼠曲草中多酚类化合物单体制备方法，其特征在于，步骤为：(1)新鲜的鼠曲草置于60℃的烘箱中烘干后粉碎至10～20目，然后粉碎的原料加入鼠曲草粉末量20～30倍、质量浓度为50～70％的乙醇，在70～80℃条件下回流提取0.5～1h，过滤，滤渣重复提取1次，合并提取液并减压浓缩至1～1.5ml/g，同时用盐酸调节pH＝3，过滤除去沉淀，将滤液以4BV/h流速通过装有D101树脂的层析柱，上柱体积为吸附后静置0.5h，用水洗至无色，然后用4～6BV质量浓度为60％乙醇以2～4BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩后冷冻干燥，得鼠曲草过柱纯化产物；(2)将正己烷、乙酸乙酯、无水甲醇、体积浓度为0.5％的冰乙酸水溶液按体积比为0.7:3.5:1:4的比例充分混合，静置分层过夜，将上相与下相分离，超声脱气，将制得的鼠曲草过柱纯化产物100～120mg用10～20mL下相超声溶解，作为进样溶液；上相溶剂以20mL/min的流速注入高速逆流色谱仪，待上相溶剂充满后，在850～900rpm/min的转速下将下相以1.5mL/min的流速泵入高速逆流色谱仪，设温箱温度20～30℃，待下相流出时即系统已经平衡，此时将准备好的进样溶液从进样口注入，同时进行图谱采集，检测波长为280nm，根据峰形手动分段收集流出液，将收集的流出液减压浓缩后冷冻干燥；该溶剂体系一次分离得到纯度分别为95.3％、98.7％、99.6％、99.7％的化合物1、化合物2、化合物3、化合物6，及化合物4、5的混合物，该混合物用少量甲醇溶解后用制备液相色谱进一步分离，A泵为质量浓度为0.5％冰醋酸，B泵为色谱甲醇，洗脱梯度为：在60min有机相以32％的体积，水相以68％的体积等度洗脱，流速15ml/min，柱温30℃，进样量1ml,检测输出波长328nm，根据峰形收集化合物4、5；(3)通过质谱、核磁共振技术对获得的5个化合物进行了结构鉴定，化合物1为绿原酸，化合物3为3,5‑双咖啡酰基奎宁酸、化合物4为4,5‑双咖啡酰基奎宁酸、化合物5为3,4‑双咖啡酰基奎宁酸，化合物6为2′,4,4′‑三羟基‑6′‑甲氧基查尔酮‑4′‑O‑β‑D‑葡萄糖苷。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陆英，刘仲华，李觅路，谭斌，林海燕，李佳银，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43