胰腺β-细胞紊乱中的可溶性MANF制造技术

本发明专利技术部分地提供用于诊断胰腺β-细胞紊乱、预测受试者发展胰腺β-细胞紊乱的风险、监测处于发展胰腺β-细胞紊乱风险的受试者的胰腺β-细胞功能或胰腺β-细胞团、监测受试者中胰腺β-细胞紊乱的治疗效力、鉴别发展胰腺β-细胞紊乱的风险增加的受试者、选择治疗胰腺β-细胞紊乱的受试者、选择参加临床研究的受试者和检测胰腺β-细胞中的内质网应激的方法。这些方法包括确定可溶性中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子(MANF)在来自受试者的生物样品中的至少一个水平。还提供包含可溶性MANF蛋白的药物组合物和包含特异性结合可溶性MANF的抗体或抗原结合性抗体片段的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】胰腺β-细胞紊乱中的可溶性MANF优先权申明本申请要求2012年1月24日提交的美国专利申请序列号61/590,021的优先权。在此将美国专利申请序列号61/590,021的整体引入以作参考。
技术介绍
受试者的胰腺β-细胞的功能或数量的缺失促成包括1型糖尿病(糖尿病(diabetesmellitus))、2型糖尿病和Wolfram综合征等的多种疾病的发病(pathogenesis)。在1型糖尿病中，患者由于胰岛素缺乏而具有高血糖水平。一般来说，胰岛素的绝对缺乏发生在患有1型糖尿病的患者中，而胰岛素的相对缺乏发生在患有2型糖尿病的患者中。越来越多的证据表明功能性胰腺β-细胞团(β-cellmass)减少是1型和2型糖尿病二者，以及糖尿病如Wolfram综合征的遗传形式的共同特征(Pipeleers等人，NovartisFoundSymp.292:19-24,2008)。在1型或2型糖尿病的进展期间，胰腺β-细胞功能和团(mass)逐渐下降，最终导致胰岛素缺乏和高血糖症。最新研究成果表明“应激的”胰腺β-细胞对功能紊乱和死亡敏感(Oslowski等人，Curr.Opin.Endocrinol.DiabetesObes.17:107-112,2010；Oslowski等人，Curr.Opin.CellBiol.23:207-215,2011；Fonseca等人，TrendsEndocrinol.Metab.22:266-274,2011)。辅助预测受试者对发展胰腺β-细胞功能紊乱和死亡的易感性的诊断标记物将有助于治疗或延缓受试者中胰腺β-细胞紊乱(例如，1型或2型糖尿病)的进展。
技术实现思路
本专利技术部分地基于如下发现：应激的胰腺β-细胞产生并分泌可溶性中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子(MANF)，可溶性MANF保护胰腺β-细胞免于内质网应激-诱导的凋亡，且可溶性MANF保持胰腺β-细胞中的内质网氧化还原体内平衡。鉴于这些发现，本文提供诊断受试者中胰腺β-细胞紊乱、预测受试者发展胰腺β-细胞紊乱的风险、监测受试者(例如，处于发展胰腺β-细胞紊乱风险的受试者)中胰腺β-细胞功能或胰腺β-细胞团、鉴别发展胰腺β-细胞紊乱的风险增加的受试者、选择治疗胰腺β-细胞紊乱的受试者、选择参加临床研究的受试者和检测胰腺β-细胞中的内质网应激的方法(例如体外方法)。这些方法包括确定可溶性MANF的至少一个水平(例如，可溶性MANF在来自受试者的生物样品中或培养基中的内源水平)。本文还提供诊断受试者的胰腺β-细胞紊乱的方法(例如，体外方法)，所述方法包括确定可溶性中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子(MANF)在来自受试者的生物样品中的水平；将可溶性MANF在生物样品中的水平与可溶性MANF的参考水平相比较；和将与参考水平相比可溶性MANF在生物样品中的水平升高的受试者鉴定为患有胰腺β-细胞紊乱。本文还提供预测受试者发展胰腺β-细胞紊乱的风险的方法(例如，体外方法)，所述方法包括：确定可溶性中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子(mesencephalicastrocyte-derivedneurotrophicfactor，MANF)在来自受试者的生物样品中的水平；将可溶性MANF在生物样品中的水平与可溶性MANF的参考水平相比较；和将与参考水平相比可溶性MANF在生物样品中的水平升高的受试者鉴定为发展胰腺β-细胞紊乱的风险增加，或者将与参考水平相比可溶性MANF在生物样品中的水平降低或没有显著差异的受试者鉴定为发展胰腺β-细胞紊乱的风险正常或降低。本文还提供监测受试者中胰腺β-细胞功能或胰腺β-细胞团的方法(例如，体外方法)，所述方法包括：确定在第一时间点时可溶性中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子(MANF)在来自受试者的生物样品中的水平；确定在第二时间点时可溶性MANF在来自受试者的生物样品中的水平；将第二时间点时可溶性MANF在生物样品中的水平与第一时间点时可溶性MANF在生物样品中的水平相比较；和将与第一时间点时可溶性MANF在生物样品中的水平相比第二时间点时可溶性MANF在生物样品中的水平升高的受试者鉴定为胰腺β-细胞功能下降或胰腺β-细胞减少，或者与第一时间点时可溶性MANF在生物样品中的水平相比第二时间点时可溶性MANF在生物样品中的水平降低或无显著变化的受试者鉴定为受试者中胰腺β-细胞功能没有变化或提高，或胰腺β-细胞团没有变化或增加。本文还提供监测受试者中胰腺β-细胞紊乱的治疗效力的方法(例如，体外方法)。这些方法包括确定在第一时间点时可溶性中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子(MANF)在来自受试者的生物样品中的水平，确定在第二时间点时可溶性MANF在来自受试者的生物样品中的水平，和将第二时间点时可溶性MANF在生物样品中的水平与第一时间点时可溶性MANF在生物样品中的水平相比较，其中(i)第一时间点为在治疗之前，和第二时间点为在治疗起始后的任意时间点，或(ii)第一时间点在治疗起始之后(followingtheinitiationoftreatment)，和第二时间点为晚于治疗期间或之后的时间点；和与第一时间点时可溶性MANF在生物样品中的水平相比第二时间点时可溶性MANF在生物样品中的水平降低表明该治疗在受试者中是有效的。本文还提供治疗或延缓受试者中胰腺β-细胞紊乱发病(onset)的方法、减少胰腺β-细胞中的内质网应激的方法(例如，体外方法)、或减少或延缓在两个以上的胰腺β-细胞群体中内质网应激-诱导的凋亡性细胞死亡的方法(例如，体外方法)。这些方法包括向受试者施用有效量的可溶性MANF或阿朴吗啡(apomorpine)，或者使胰腺β-细胞或胰腺β-细胞群体与可溶性MANF或阿朴吗啡接触。在某些实施方案中，可溶性MANF包含与哺乳动物可溶性MANF蛋白序列(例如，SEQIDNOS:2和4-7任何之一)至少80％(例如，85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一的序列。在某些实施方案中，例如其中所述方法包括施用阿朴吗啡，受试者不患有勃起功能障碍或帕金森氏病。本文还提供在制造用于治疗或延缓受试者中胰腺β-细胞紊乱发病的医药品时使用本文记载的可溶性MANF(例如，包括与SEQIDNO:2至少80％同一的序列的可溶性MANF)或阿朴吗啡的任一种的方法。本文还提供在治疗或延缓受试者中胰腺β-细胞紊乱发病中使用的分离的可溶性MANF(例如，包括含与SEQIDNO:2至少80％同一的序列的分离的可溶性MANF)或阿朴吗啡。本文还提供筛选用于治疗或延缓受试者中胰腺β-细胞紊乱发病的候选化合物的方法(例如，体外方法)、减少胰腺β-细胞中的内质网应激的方法(例如，体外方法)、和减少或延缓胰腺β-细胞中内质网应激-诱导的凋亡性细胞死亡(apoptoticcelldeath)的方法(例如，体外方法)。这些方法包括提供胰腺β-细胞，使胰腺β-细胞与候选化合物接触，确定在候选化合物的存在下由胰腺β-细胞产生的可溶性MANF的水平，将由胰腺β-细胞产生的可溶性MANF的水平与可溶性MANF的参考水平相比较，和选择与参考水平相比由胰腺β-细胞产生的可溶性MANF的水平升高本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断受试者的胰腺β‑细胞紊乱的方法，所述方法包括：确定可溶性中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子(MANF)在来自所述受试者的生物样品中的水平；和将可溶性MANF在所述生物样品中的水平与可溶性MANF的参考水平相比较，其中与所述参考水平相比可溶性MANF在所述生物样品中的水平升高表明所述受试者患有胰腺β‑细胞紊乱。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.01.24 US 61/590,0211.一种组合物在制备治疗或延缓受试者的胰腺β-细胞紊乱发病的药物中的用途，其中所述组合物包括有效量的可溶性中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子，所述可溶性中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子具有与SEQIDNO:2至少96％同一的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述氨基酸序列与SEQIDNO:2至少97％同一。3.根据权利要求1所述的用途，其中所述氨基酸序列与SEQIDNO:2至少99％同一。4.根据权利要求1所述的用途，其中所述氨基酸序列为SEQIDNO:2。5.根据权利要求1-4任一项所述的用途，其中所述胰腺β-细胞紊乱选自由1型糖尿病、2型糖尿病和Wolfram综合征组成的组。6.根据权利要求1-4任一项所述的用途，其中治疗所述胰腺β-细胞紊乱导致一种或多种下列结果：受试者的血糖水平降低、受试者的糖化血红蛋白水平降低、受试者的胰岛素生产的损失比例降低、和受试者的胰腺β-细胞团的损失比例降低。7.根据权利要求1-4任一项所述的用途，其中所述组合物能够被口服、静脉内注射、动脉内注射、皮下注射、肌内注射、颅内注射或经注射入脑脊液而施用。8.根据权利要求1-4任一项所述的用途，其中所述组合物被制成固体或生理上可接受的液体载体。9.一种特异性结合可溶性中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子的抗体或抗原结合性抗体片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于诊断受试者的胰腺β-细胞紊乱、鉴别受试者处于发展胰腺β-细胞紊乱的风险、或监测受试者的胰腺β-细胞功能或胰腺β-细胞团。1...

【专利技术属性】
技术研发人员：浦野文彦，金藏孝介，
申请(专利权)人：马萨诸塞大学，
类型：发明
国别省市：美国;US