一种基于双酶偶联高通量检测D-阿洛糖的新方法技术

技术编号:10743626 阅读:123 留言:0更新日期:2014-12-10 16:29
本发明专利技术涉及一种基于双酶偶联反应的高通量检测D-阿洛糖的新方法。具体涉及利用吡喃糖氧化酶和过氧化物酶偶联,检测D-阿洛糖。该方法既可用于液体培养基中反应产物D-阿洛糖的检测,也可用于检测固体培养基中反应产物D-阿洛糖的生成。当用于液体培养基的检测时,反应产物与N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(HSDA)作用产生蓝色水溶性醌类物质,利用96孔酶标板在583nm处读取吸光值。吸光值与其浓度成线性关系,能够根据标准曲线计算浓度,并利用96孔酶标板进行高通量检测。当该方法用于固体培养基中D-阿洛糖的检测时,反应产物与二氨基联苯胺(DAB)作用生成不溶于水的褐色吩嗪聚合体,利用此显色反应可在培养皿中挑出阳性菌落。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用吡喃糖氧化酶和过氧化物酶偶联反应的检测D‑阿洛糖的高通量筛选新方法,当用于液体培养基时,步骤如下:(1)将单菌落或纯化后的酶转入含转化底物的96深孔培养板中;(2)将96深孔培养板利用冷冻离心机在合适的条件下离心,取其上清液进行测定;(3)利用双酶偶联的方法,在96孔板板中结合试剂A测定上述上清液中D‑阿洛糖的含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:柏玮朱玥明李星硕门燕孙媛霞
申请(专利权)人:中国科学院天津工业生物技术研究所
类型:发明
国别省市:天津;12

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