一种检测蒿乙醚含量和有关物质的高效液相色谱法制造技术

技术编号:10685976 阅读:220 留言:0更新日期:2014-11-26 16:08
本发明专利技术涉及一种药物分析领域,具体涉及一种检测蒿乙醚含量和有关物质的高效液相色谱法。色谱条件为:C18(4.6×250mm 5μm),以乙腈-水梯度洗脱,洗脱体积比为70%:30%(0min),70%:30%(25min),85%:15%(35min),70%:30%(45min),使用DAD检测器,检测波长为216nm。该检测方法准确可靠、分离效果好,专属性强,能高效测定蒿乙醚中有关物质和含量。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种药物分析领域,具体涉及。色谱条件为:C18(4.6×250mm?5μm),以乙腈-水梯度洗脱,洗脱体积比为70%:30%(0min),70%:30%(25min),85%:15%(35min),70%:30%(45min),使用DAD检测器,检测波长为216nm。该检测方法准确可靠、分离效果好,专属性强,能高效测定蒿乙醚中有关物质和含量。【专利说明】
本专利技术涉及一种测定蒿乙醚含量及有关物质的高效液相色谱法,属于药物分析领域。
技术介绍
蒿乙醚(结构式见附图1)是一种衍生自黄花蒿的抗疟化合物。分子式=C17H28O5,白色结晶或结晶性粉末。蒿乙醚为二氢青蒿素的乙醚衍生物,其已经进行了广泛的临床前、动物和毒理学研究以及为药物调控,目前已被证实具有前景的活性,并且蒿乙醚可治疗无并发症的疟疾,有严重并发症的疟疾、脑疟疾和多药性疟疾。而且蒿乙醚比青蒿素更有效,其表现出清除率更快的杀裂繁体作用、没有副作用的短的发热清除时间和低的复发率,对疟原虫无性体有较强的杀灭作用,能迅速控制症状。世界卫生组织(WHO)也已经将蒿乙醚作为治疗生命的抗疟药物。但是对于蒿乙醚原料药中蒿乙醚含量及有关物质的测定目前却少有研究,《国际药典》2011版对蒿乙醚的含量和相关物质的测定是采用高效液相色谱法,色谱条件里的波长为210nm,流动相选用乙腈-水(62:38)等度洗脱。就国际药典检测蒿乙醚含量和相关杂质的方法中,等度洗脱不能完全分离蒿乙醚原料中的有关物质,对于蒿乙醚纯度和有关物质的含量检测存在误差,并且该检测方法使蒿乙醚样品的色谱峰存在拖尾现象,拖尾因子T = 1.2不符合中国药典2010版规定的T = 0.95?1.05。为了解决上述问题本专利技术提供的检测方法是采用乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,建立一种新的蒿乙醚原料药中蒿乙醚含量和有关物质的检测方法,该检测方法使色谱峰分离效果很好,分离度大于1.5符合中国药典2010版标准,并且色谱峰无拖尾现象,拖尾因子T = 0.98符合中国药典2010版的规定。所以该检测方法对蒿乙醚原料药的质量控制和杂质分析具有重要的应用价值。
技术实现思路
本专利技术经多次精密试验提供一种更准确、高效的测定蒿乙醚含量和有关物质的高效液相色谱法,用于蒿乙醚原料药的质量控制。为达到目的,本专利技术采用了如下技术方案: 本专利技术的一个具体的实施例中,本专利技术采用Agilent高效液相色谱仪测定蒿乙醚含量和有关物质,其选用十八烷基键合硅胶色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱。 本专利技术又一个具体的实施例中,十八烷基键合硅胶色谱填料颗粒度为3-5 μ m,优选4.6 μ m,色谱柱的长度为150mm或250mm,优选250mm。 本专利技术再一个具体的实施例中,所述乙腈-水梯度洗脱的体积比为70%:30%(Omin) ,70%:30% (25min) ,85%:15% (35min) ,70%:30% (45min)。 本专利技术再一个具体的实施例中,利用DAD检测器进行190nm—400nm全波长扫描(图谱见图5),结果蒿乙醚在190-250nm范围处有较大吸收,最大吸收波长为216nm,此波长下蒿乙醚的相关物质也有较好的吸收,因此选择216nm作为蒿乙醚含量和有关物质测定的检测波长。 本专利技术再一个具体的实施例中,利用标准品溶液多次进样来确定进样量,进样精密度试验次数为6次,所得最佳进样量为20 μ I。 本专利技术还一个具体的实施例中,所述流动相的流速为0.5-1.2ml/min,优选Iml/min,其特点在于选用上述流速所得蒿乙醚样品有很好分离,样品分离度均大于1.5,符合中国药典2010版的规定。 本专利技术提供的一种HPLC法测定蒿乙醚有关物质的方法,其包括以下步骤: 标准品溶液配制:取蒿乙醚标准品适量,用乙腈溶解并定容,配制成蒿乙醚浓度为5mg/ml的标准品溶液。 供试品溶液配制:取蒿乙醚原料药适量,用乙腈溶解并定容,配制成蒿乙醚浓度为5mg/ml的供试品溶液。 对照品溶液配制:取上述蒿乙醚标准品溶液Iml置于200ml容量瓶,用乙腈稀释至定容,配制成蒿乙醚浓度为0.025mg/ml对照品溶液。 【专利附图】【附图说明】 图1为蒿乙醚结构式 图2为蒿乙醚供试品液相色谱图 图3为蒿乙醚标准品液相色谱图 图4为蒿乙醚对照品液相色谱图 图5为蒿乙醚检测波长扫描图谱 【具体实施方式】 色谱条件: 采用Agilent高效液相色谱仪,用色谱柱C18 (4.6x250mm 5 μ m),以乙腈-水梯度洗脱,洗脱体积比为 70%:30% (Omin) ,70%:30% (25min) ,85%:15% (35min) ,70%:30%(45min),检测器为DAD检测器,检测波长216nm,流速为lml/min,进样量为20 μ I。 分别取供试品溶液和标准品溶液,注入液相色谱仪,按照本专利技术色谱条件进行测定,含量按如下公式计算: 蒿乙醚含量(%) = (A1XC2)/(A2XC1) 其中Al为待测样品峰面积 A2为标准品峰面积 Cl待测样品浓度(mg/ml) C2标准品浓度(mg/ml) 分别取供试品溶液和对照品溶液,注入液相色谱仪,按照本专利技术色谱条件进行测定,供试品如有杂质峰,杂质含量按如下公式计算: 蒿乙醚有关物质含量(%) = (AX I X 10 XW2)/(BX 10 X 200 Xffl) 其中,A为供试品溶液中杂质峰的峰面积; B为对照品溶液中蒿乙醚的峰面积; Wl为配制蒿乙醚供试品溶液时称量的重量; W2为配制蒿乙醚标准品溶液时称量的重量。 实施例1 实验材料:按照上述色谱条件,对本公司实验室已标定蒿乙醚供试品含量为99.1 %,单杂为0.26%,总杂为0.41%,0.25%与0.5%质检的杂质个数为I个。蒿乙醚标准品,购自中国药品生物制品检定所,含量为99.3%。 色谱条件:采用Agilent高效液相色谱仪,DAD检测器,色谱柱C18(4.6x250mm5 μ m),进样量为20 μ I,流速为1.0ml/min,检测波长为216nm,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,其梯度比如表I。 表I乙腈-水梯度比 时间(min)乙腈(v/v%)水(v/v%) O7030 257030 358515 457030 实验步骤: 取本公司蒿乙醚适量,用乙腈溶解并定容,配制成浓度为5mg/ml的蒿乙醚供试品溶液,供试品溶液同法重复配制3次。 取蒿乙醚标准品适量,用乙腈溶解并定容,配制成浓度为5mg/ml的蒿乙醚标准品溶液,标准品溶液同法重复配制3次。 分别取供试品溶液和标准品溶液,注入液相色谱仪,按照本专利技术色谱条件进行测定并记录色谱图,其中同一标准品重复进样5次,供试品溶液和标准品溶液所得峰面积按上述含量计算公式计算供试品中蒿乙醚的含量。 图2为供试品蒿乙醚色谱图,蒿乙醚主峰保留时间为15.88min,供试品中分离出两种杂质,保留时间分别为4.2min和10.5min,两杂质峰与主峰分离度分别为3.78和 1.51,分离效果良好(均大于1.5),符合2010版中国药典的标准。标准品本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种检测蒿乙醚含量和有关物质的高效液相色谱法,其特征在于:采用高效液相色谱法测定蒿乙醚含量及有关物质,选用高效液相色谱仪为美国Agilent,十八烷基键合硅胶色谱柱,以乙腈‑水为流动相进行梯度洗脱,DAD检测器,最佳检测波长为216nm。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:张梅彭学东赵金召祁法娟
申请(专利权)人:张家港威胜生物医药有限公司
类型:发明
国别省市:江苏;32

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