本发明专利技术提供了一种新的预防猪鼻支原体感染细胞的方法及制剂。具体地，本发明专利技术提供了针对猪鼻支原体膜蛋白P37或宿主细胞膜蛋白Annexin A2的拮抗剂在制备预防猪鼻支原体感染细胞或促细胞迁移的制剂中的应用。本发明专利技术主要是发现了猪鼻支原体通过其表面的膜蛋白P37的氨基端22个氨基酸片段与细胞膜蛋白Annexin A2氨基端25个氨基酸片段相互作用感染细胞，从而可以利用抗P37蛋白抗体、或猪鼻支原体P37的氨基端多肽、或Annexin A2氨基端多肽或抗宿主细胞膜蛋白Annexin A2的抗体预防猪鼻支原体感染细胞。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及预防猪鼻支原体感染细胞的方法及制剂，具体地涉及针对猪鼻支原体通过其表面的膜蛋白P37的氨基端22个氨基酸片段与细胞膜蛋白Annexin A2相互作用感染细胞这一发现、而提供的针对猪鼻支原体膜蛋白P37或宿主细胞膜蛋白Annexin A2的拮抗剂在制备预防猪鼻支原体感染细胞或促细胞迁移的制剂中的应用，以及预防猪鼻支原体感染细胞或促细胞迁移的方法。
技术介绍
支原体属于原核生物中的柔膜体纲，是自然界存在的、能独立复制的最小微生物，其大小约为0.1m，能透过微孔滤膜，存在于宿主细胞的膜表面或内吞到胞内(Lo SC.Mycoplasmas and AIDS.In:Maniloff J,McElheney,RN,Finch LR,Baseman JB,editors.Mycoplasmas:molecular biology and pathogenesis.Washington,DC:Am Soc Microbiol Press；1992.p.525-45)。值得注意的是，越来越多的实验数据提示支原体的持续性慢性感染与肿瘤的发生发展有一定的相关性(Namiki K,Goodison S,Porvasnik S,et al.(2009)Persistent Exposure to Mycoplasma Induces Malignant Transformation of Human Prostate Cells.PLoS ONE 4,e6872；Urbanek C,Goodison S,Chang M,et al.(2011)Detection of antibodies directed at M.hyorhinis p37 in the serum of men with newly diagnosed prostate cancer.BMC Cancer 11,233；Yang H,Qu LK,Ma HC,et al.(2010)Mycoplasma hyorhinis infection in gastric carcinoma and its effects on the malignant phenotypes of gastric cancer cells.BMC Gastroenterol 10,132)。早在1965年，Paton等报道口腔支原体可引起人类二倍体细胞株WI38的染色体异常，并诱导其发生细胞转化(Paton GR,Jacobs JP,Perkins FT.(1965)Chromosome changes in human Diploid-cell cultures infected with mycoplasmas.Nature 207,43-45)。1986年,H.Kotani等发现非凡螺原体可使鼠NIH3T3细胞及猴肾CV21细胞发生恶性转化(Kotani H,Phillips D,McGarrity GJ.Malignant transformation of NIH-3T3 and CV-1 cells by a helical mycoplasma,Spiroplasma mirum,strain SMCA.(1986)In Vitro Cell Dev Biol 22,756-762)。引起研究者更多兴趣的是Tsai等的研究工作，他们用发酵支原体及穿透支原体感染小鼠胚胎细胞系C3H10T1/2，在感染11周后细胞出现恶性改变，在感染18周之后细胞可在软琼脂上形成集落，在裸鼠体内成瘤(Tsai S,Wear DJ,Shih JW,et al.Mycoplasmas and oncogenesis:persistent infection and multistage malignant transformation.(1995)Proc Natl Acad Sci USA 92,10197-10201)。2009年Namiki等人研究发现生殖支原体或猪鼻支原体的持续感染可以增加前列腺增生上皮细胞BPH-1的迁移和侵袭能力，引起细胞核型异常，并可在裸鼠体内成瘤(Namiki K,Goodison S,Porvasnik S,et al.(2009)Persistent Exposure to Mycoplasma Induces Malignant Transformation of Human Prostate Cells.PLoS ONE 4,e6872)。这些研究均说明支原体感染与肿瘤的发生发展有密切的关系。专利技术人所在的实验室在上世纪八十年代通过采用肿瘤细胞免疫，制备获得了鼠源性的抗肿瘤单克隆抗体PD4(Dong ZW,Wan WH,Li ZF,et al.A monoclonal antibodies PD4 against gastric cancer cell line MGC803.(1985)Shengwu Huaxue Zazhi 2,52-58)，但后续的抗原鉴定工作却发现单抗PD4对应的抗原并非来自于肿瘤细胞，而是来自于猪鼻支原体，提示猪鼻支原体可能和肿瘤相关。2001年，专利技术人所在的实验室黄甦等人采用PD4，通过免疫组织化学染色的方法对包括胃癌及肠癌组织在内的600例组织样本进行检测，结果显示该抗体与胃癌组织的阳性反应率为56％，而相应的非肿瘤组织阳性率分别为：慢性浅表型胃炎:28％，胃良性溃疡：30％，肠上皮：37％(Huang S,Li JY,Wu J,et al.Mycoplasma infections in different human carcinomas.(2001)World J Gastroenterol 7,266-269)。由此可见，胃癌与胃良性疾患的猪鼻支原体感染率有显著的差异，胃癌组明显高于胃良性疾病各组，并且，随着疾病的加重，猪鼻支原体的感染率也随之增加。这些结果提示猪鼻支原体的感染可能和疾病以及肿瘤的发生发展存在一定相关性。此外，来自第四军医大学的曹军等人亦利用同样的方法检测了95例肾癌组织中的猪鼻支原体感染情况，发现64.2％的组织中存在猪鼻支原体感染，而对猪鼻支原体膜表面蛋白p40蛋白在不同病理类型肾癌组织中的表达分析结果表明，猪鼻支原体感染与人类肾癌的病理类型不存在某种相关性(曹军,李建平,程伟,等.猪鼻支原体P40蛋白在肾癌组织中的表达及意义.(2008)西安交通大学学报(医学版)29,556-558)。2010年，杨华等人用PD4对61例胃癌组织样本和109例卵巢癌组织标本进行了免疫组织化学染色分析，结果发现，61例胃癌标本中猪鼻支原体感染率为45.9％，猪本文档来自技高网...
【技术保护点】
针对猪鼻支原体膜蛋白P37或宿主细胞膜蛋白Annexin A2的拮抗剂在制备预防猪鼻支原体感染细胞或促细胞迁移的制剂中的应用。
【技术特征摘要】
1.针对猪鼻支原体膜蛋白P37或宿主细胞膜蛋白Annexin A2的拮抗剂在制备预
防猪鼻支原体感染细胞或促细胞迁移的制剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，针对猪鼻支原体膜蛋白P37的拮抗剂为
与猪鼻支原体膜蛋白P37结合、从而抑制猪鼻支原体与细胞结合的试剂。
3.根据权利要求1所述的应用，其中，针对猪鼻支原体膜蛋白P37的拮抗剂为
与猪鼻支原体膜蛋白P37氨基端第2-23位氨基酸结合、从而抑制猪鼻支原体与细胞
结合的试剂。
4.根据权利要求1所述的应用，其中，针对猪鼻支原体膜蛋白P37的拮抗剂为
抗猪鼻支原体膜蛋白P37或其抗原性片段的特异性单克隆抗体或多克隆抗体，或者包
含Annexin A2氨基端第2-26位氨基酸的多肽或蛋白。
5.根据权利要求1所述的应用，其中，针对宿主细胞膜蛋白Annexin A2的拮抗
剂为与Annexin A2结合、从而抑制猪鼻支原体与细胞结合的试剂。
6.根据权利要求1所述的应用，其中，针对宿主细胞膜蛋白Annexin A2的拮抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：寿成超，段红英，陈玲，杨华，孟麟，
申请(专利权)人：北京市肿瘤防治研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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