高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒制造技术

技术编号:10448011 阅读:150 留言:0更新日期:2014-09-18 11:29
本发明专利技术涉及一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,该试剂盒是由试剂R1和试剂R2组成的液体型双试剂,其中试剂R1组成和浓度为:偶联剂(DSBmT)0.5-4.0mmol/L,胆固醇氧化酶(CHOD)3500-8500U/L,过氧化物酶(POD)1000-4000U/L,表面活性剂0.5-1.5g/L,缓冲液(pH6.0)50-160mmol/L;试剂R2组成和浓度为:4-氨基替吡啉(4-AAP)1.0-4.5mmol/L,胆固醇酯酶700-1300U/L,表面活性剂0.5-1.5g/L,缓冲液(pH6.0)50-160mmol/L。本发明专利技术高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒特异性更好,抗干扰能力更强,可以抗血红蛋白、抗胆红素、抗坏血酸、rntralipos的干扰,线性更高等优点,适用于全自动生化分析仪,有较大的临床应用价值,试剂稳定性可达2年,本发明专利技术的设计合理,实用性强,适于广泛使用和推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,属于生物制剂领域。
技术介绍
 胆固醇等脂质在血清中与脱辅蛋白质配合生成脂蛋白,还会结合到脂蛋白的结构中,并以乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等形式存在。1977年Frammingham大规模的流行病学调查表明,血浆高密度脂蛋白胆固醇(血浆HDL-C)下降是缺血性心脏病的主要危险因素,自此以后,HDL-C的测定日益受到临床上的普遍重视。HDL是由动脉硬化所引起的心脏疾病的预防因子,因此 HDL-C的测定在动脉硬化症发病方面有重要的预测作用,这在临床上具有重要的意义。直接法根据反应原理分为选择性PEG 修饰酶法、选择性抑制法及PEG/抗体包裹法。酶修饰法和PEG/抗体包裹法虽然临床应用较多,但价格较高,而选择性抑制法精密度高,线性范围可达1500mg/L,回收率90%~110%,但在抗干扰方面尚存在缺陷。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术存在的缺陷,提供一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒。实现本专利技术目的的技术方案是:一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,该试剂盒由试剂R1和试剂R2以体积比为3:1混合组成,其中试剂组成和浓度为:试剂R1:偶联剂(DSBmT)             0.5-4.0mmol/L 胆固醇氧化酶(CHOD) 3500-8500U/L过氧化物酶(POD) 1000-4000U/L表面活性剂                0.5-1.5g/L缓冲液(pH6.0)                 50-160mmol/L试剂R2:4-氨基替吡啉(4-AAP)         1.0-4.5mmol/L胆固醇酯酶                  700-1300U/L表面活性剂                   0.5-1.5g/L缓冲液(pH6.0)                 50-160mmol/L本专利技术高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒优选为:试剂R1:偶联剂(DSBmT)                1.0-3.0mmol/L 胆固醇氧化酶(CHOD)  4500-7500U/L过氧化物酶(POD)  1500-3000U/L表面活性剂                 0.8-1.3g/L缓冲液(pH6.0)                  80-120mmol/L试剂R2:4-氨基替吡啉(4-AAP)            2.0-3.0mmol/L胆固醇酯酶                   850-1200U/L表面活性剂                 0.8-1.3g/L缓冲液(pH6.0)                  80-120mmol/L本专利技术高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒最优选为:试剂R1:偶联剂(DSBmT)                 2.0mmol/L 胆固醇氧化酶(CHOD)   6600U/L过氧化物酶(POD)   2500U/L表面活性剂                     1g/L缓冲液(pH6.0)                   100mmol/L试剂R2:4-氨基替吡啉(4-AAP)             2.5mmol/L胆固醇酯酶                   1000U/L表面活性剂                  1g/L缓冲液(pH6.0)                  100mmol/L本专利技术高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒中R1和 R2的原料选择依据是:DSBmT和4-氨基替吡啉(4-AAP):利于紫红色色素的快速形成。胆固醇氧化酶(CHOD)和过氧化物酶(POD):起氧化HDL-C的作用。表面活性剂:第一步反应中阴离子表面活性剂包被HDL-C,第二部反应中阳离子表面活性剂释放HDL-C。缓冲液(pH6.0):利于试剂中各种成分的分散,可提高试剂的稳定性。本专利技术试剂盒试剂R1和试剂R2的制备采用常规方法混合搅匀即可。本专利技术的试剂盒通过下列方法测定高密度脂蛋白胆固醇:用两种不同的表面活性剂及多阴离子,根据脂蛋白的酶反应选择性,直接测定HDL-C,第一反应中,加入多阴离子和分散型表面活性剂,LDL、VLDL和CM先在多阴离子下聚集,由于反应抑制剂与LDL、VLDL和CM的疏水性基因具有高度亲和力,故其吸附在聚集的脂蛋白颗粒表面形成遮蔽圈,同时在HDL表面也吸附有少量反应抑制剂,但由于亲和力较弱,其结合是可逆的。第二反应中,与胆固醇酶试剂一起加入可溶性表面活性剂,可溶性表面活性剂对HDL颗粒中亲水性基团具有亲和力,由于可溶性表面活性剂对HDL可溶性的强特异性作用,可置换其表面吸附的少量反应抑制剂,从而与酶试剂反应,达到无需沉淀分离直接测定HDL-C的目的。应用本专利技术高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒测定样本中HDL的测定方法如下:样本加试剂R1混匀,30~40℃反应3~5min后读取吸光度A1,加入试剂R2混匀,30~40℃反应3~5min后读取吸光度A2,根据公式HDL=样本吸光度(A2-A1)×标准液浓度/标准液吸光度 (A2-A1),得出HDL的含量,其中,样品用量3μL,试剂R1用量200-300μL,试剂R2用量30-120μL。本专利技术具有积极的效果:特异性更好,抗干扰能力更强,可以抗血红蛋白、抗胆红素、抗坏血酸、rntralipos的干扰,线性更高等优点,适用于全自动生化分析仪,有较大的临床应用价值,试剂稳定性可达2年,本专利技术的设计合理,实用性强,适于广泛使用和推广。附图说明为了使本专利技术的内容更容易被清楚地理解,下面根据具体实施例并结合附图,对本专利技术作进一步详细的说明,其中图1 本专利技术试剂盒测定高密度脂蛋白胆固醇的实时反映曲线图。图2 是对比试剂盒测定高密度脂蛋白胆固醇的实时反映曲线图。图1、图2中横坐标为日立7060全自动生化分析仪反应监测的时刻,按10分钟分为31个点,每个点都有吸光度反应的时间点,纵坐标为吸光度A。具体实施方式下面结合图1、图2和表格对本专利技术高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒与对比试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:该试剂盒是由试剂R1和试剂R2组成的液体型双试剂,其中试剂组成和浓度为:试剂R1:试剂R2:

【技术特征摘要】
1.一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:该试剂盒是由试
剂R1和试剂R2组成的液体型双试剂,其中试剂组成和浓度为:
试剂R1:
试剂R2:
2.根据权利要求1所述的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:
试剂R1:
试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员:曾宪亮
申请(专利权)人:南京澳林生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:江苏;32

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1