本发明专利技术公开了HGF中和性抗体和/或c-Met抑制剂提高乳腺癌化疗敏感性的应用，属于肿瘤生物治疗技术领域。本发明专利技术针对HGF的中和性抗体和受体酪氨酸激酶c-Met的小分子抑制剂可有效杀伤Tamoxifen耐药的ER阳性乳腺癌细胞。证实HGF的中和性抗体和受体酪氨酸激酶c-Met的小分子抑制剂可用于内分泌治疗失败的ER阳性乳腺癌患者，这对于提高乳腺癌化疗敏感提供了新的切入点，为有效提高乳腺癌的临床疗效提供了新的药物靶标选择。
【技术实现步骤摘要】
HGF中和性抗体和/或c-Met抑制剂提高乳腺癌化疗敏感性的应用
本专利技术属于肿瘤生物治疗
，具体涉及HGF中和性抗体和/或C-Met抑制剂提高乳腺癌化疗敏感性的应用。
技术介绍
肿瘤的发生严重威胁着人类健康，对肿瘤发生发展中涉及基因的研究一直是人类生物学研究的重要课题。乳腺癌是女性最常见的肿瘤之一，发病率居女性恶性肿瘤之首，且呈逐年上升趋势，严重威胁着女性的身体健康。乳腺癌属激素依赖性肿瘤，而雌激素则是癌细胞生长的主要驱动因子，雌激素受体(ER)阳性乳腺癌的内分泌治疗就是应用抗雌激素药物，消除雌激素与雌激素受体的相互作用，促使癌细胞凋亡。雌激素受体是一种激素依赖核转录因子，它在大约70%的乳腺肿瘤中都有表达。雌激素结合雌激素受体导致受体二聚化并被结合到雌激素受体靶基因启动子区域的雌激素反应元件上。由于雌激素受体在乳腺癌的发生发展中发挥了关键作用，目前针对雌激素受体的乳腺癌内分泌治疗通过如下方式:靶向作用雌激素受体通路，降低雌激素水平，拮抗雌激素受体的功能，或下调雌激素表达水平。选择性雌激素受体调节因子他莫昔芬(tamoxifen)能通过竞争结合雌激素受体并抑制乳腺癌生长，其已成为近30年来最主要的乳腺癌的内分泌治疗药 物。然而，原发性或继发性他莫昔芬耐药是导致乳腺癌内分泌治疗失败的主要原因。近年来，HGF/c-Met信号通路正成为学术界研究的热点，HGF/c-Met通路在肿瘤的发生发展中扮演着非常重要的角色，并参与肿瘤的侵袭和转移。该通路的标志特征是HGF (Hepatocyte growth factor,肝细胞生长因子)与其配体c_Met蛋白的结合引起一系列信号传导的酶促反应，并由c-Met下游停泊蛋白-生长因子受体结合蛋白2(GRB2)及接头蛋白I(GABl)的激活和该信号通路与其他信号通路问的交联而起作用。多项研究表明HGF/c-Met通路参与肿瘤的发生、发展和侵袭转移，也可作为肿瘤组织分级和临床分期的生物学标志物。同时，c-Met同EGFR，ERBB2及胰岛素样生长因子受体等其它通路，是癌症进展和治疗耐药的主要机制。c-Met在多种肿瘤中表达，并且与疾病进展及预后相关。尽管目前对c-Met抑制剂的临床研究仍处于早期阶段，但该领域从早期基于大量实验数据的概念阶段到现在部分应用于临床研究中，还是为攻克癌症带来了新的希望。目前，人源化HGF中和性抗体和c-Met的抑制剂在胃癌和非小细胞肺癌治疗过程中都已进入临床试验，显示出很好的临床应用前景。随着对HGF/c-Met通路更深入的研究，透彻地了解其作用机制，不仅能进一步完善细胞信号转导通路，而且对肿瘤的靶向治疗将有更好的指导意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种HGF中和性抗体和/或c-Met抑制剂提高乳腺癌化疗敏感性的应用，HGF中和性抗体和/或c-Met抑制剂能够提高乳腺癌化疗敏感性，能够用于制备针对内分泌治疗失败的雌激素受体阳性乳腺癌药物，从而为提高乳腺癌临床疗效提供了新的药物靶标选择。本专利技术是通过以下技术方案来实现:HGF中和性抗体和/或c-Met抑制剂在制备抗乳腺癌的药物中的应用。所述的药物为对乳腺癌内分泌治疗药物产生耐药性的药物。所述的对乳腺癌内分泌治疗药物为雌激素受体拮抗药物。所述的雌激素受体拮抗药物为他莫昔芬。所述的药物是促进抑制表达HGF蛋白的乳腺癌细胞的增殖的药物。所述的HGF蛋白为外周血中的分泌蛋白。所述的药物是抑制c-Met及c-Met下游分子Gabl高度磷酸化表达的药物。所述HGF中和性抗体为HGF蛋白的单克隆抗体或多克隆抗体。所述的c-Met 抑制剂为 PHA-665752、Foretinib 或 Crizotinib。与现有技 术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果:本专利技术提供的HGF中和性抗体和/或c-Met抑制剂在制备抗乳腺癌药物中的应用，通过建立雌激素受体拮抗药物——他莫昔芬的耐药细胞株，获得了具有稳定他莫昔芬耐药性的细胞株，然后经过对乳腺癌亲本细胞和癌细胞耐药细胞中HGF的表达差异验证，结果显示HGF在乳腺癌耐药细胞中的表达显著升高；本专利技术还通过检测蛋白水平上乳腺癌亲本细胞和耐药细胞中HGF/c-Met分子通路信号蛋白表达差异，结果显示HGF/c_Met-GabI信号在乳腺癌耐药细胞高度活化。因此，本专利技术表明HGF高表达水平及受体酪氨酸激酶c-Met及其下游分子Gab-1的高活化(磷酸化修饰)状态，与雌激素受体阳性乳腺癌内分泌治疗耐药密切相关，HGF的表达水平和c-Met信号通路的活化水平分析可用于ER阳性乳腺癌患者内分泌治疗的预后评估，为提高乳腺癌化疗敏感提供新的切入点，HGF的中和性抗体和/或c-Met的小分子抑制剂可用于内分泌治疗失败的雌激素受体阳性乳腺癌患者，从而可应用于抗乳腺癌药物的制备。【附图说明】图1为MTT检测筛选得到的tamoxifen耐药细胞MCF_7TaniK和亲本细胞MCF-7细胞对tamoxifen的耐药能力差异；图2为Real-time PCR检测筛选得到的MCF_7TamK和亲本细胞MCF-7细胞中HGF的表达水平差异；图3为Western Blot检测蛋白水平上MCF-7和MCF_7TamK中HGF/C-MET分子通路信号蛋白表达差异；图4~图7为细胞毒性-增殖检测在ER阳性乳腺癌MCF-7和ZR-75-1给予HGF (体外纯化表达和MCF-7TamK细胞分泌上清)刺激后对他莫昔芬的耐药性图8~图9为MTT检测在乳腺癌MCF_7TamK细胞给予HGF中和抗体刺激后细胞增殖能力的改变。图10乳腺癌MCF_7TamK细胞给予受体酪氨酸激酶c_Met的小分子抑制剂后对他莫昔芬的耐药性改变。图11为乳腺癌MCF_7TamK细胞给予HGF中和性抗体和c_Met抑制剂联合应用后，对他莫昔芬的耐药性改变。【具体实施方式】下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。1.乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬耐药细胞株的建立1.1细胞培养及他莫昔芬(tamoxifen)耐药细胞株的筛选采用高浓度递增法结合小剂量维持作用法，诱导获得乳腺癌耐tamoxifen细胞株MCF-7TaniK。MCF-7细胞贴壁生长，达指数生长期时，于DMEM(含胰岛素)培养基中加浓度为I μ mol/L他莫昔芬，连续作用24h后撤药，吸弃培养基，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗一遍，换不含药的新鲜DMEM(含胰岛素)培养基继续培养。敏感细胞逐渐死亡，待存活细胞恢复正常生长，融合达80%，再进行下一浓度的诱导。以l、2、5、8ymol/L浓度梯度逐渐加大他莫昔芬药物诱导浓度到10 μ mol/L，如此反复诱导、换液、传代，历时10个月，挑选出经lOymol/L他莫昔芬作用后存活的MCF-7细胞克隆，培养此细胞克隆，筛选出能维持浓度为10 μ mol/Ltamoxifen培养基中稳定生长的单细胞克隆，即MCF_7TamK细胞，并扩大培养该细胞克隆，即得到乳腺癌MCF-7细胞 耐他莫昔芬细胞株。为维持其耐药性，培养液中持续加入10 μ mol/L tamoxifen ο在进行实验的前两周，MCF-7TamE细胞脱离tamoxifen培养。[0031 ] 1.2MTT分析筛选本文档来自技高网...
【技术保护点】
HGF中和性抗体和/或c‑Met抑制剂在制备抗乳腺癌的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.HGF中和性抗体和/或C-Met抑制剂在制备抗乳腺癌的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为对乳腺癌内分泌治疗药物产生耐药性的药物。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的对乳腺癌内分泌治疗药物为雌激素受体拮抗药物。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的雌激素受体拮抗药物为他莫昔芬。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物是促进抑制表达HGF蛋白的乳腺癌细胞的增殖的药物。6.如权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：张健，张媛，叶明翔，药立波，陈苏宁，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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