具有降低的效应子功能的Fc变体制造技术

技术编号:10094951 阅读:181 留言:0更新日期:2014-05-28 19:18
本发明专利技术涉及生产包含Fc区的亲本多肽的变体的方法,所述变体展示出相比所述亲本多肽降低的与蛋白质C1q和与至少一种受体FcgγR的结合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及生产包含Fc区的亲本多肽的变体的方法,所述变体展示出相比所述亲本多肽降低的与蛋白质C1q和与至少一种受体FcgγR的结合。【专利说明】具有降低的效应子功能的Fe变体专利
本专利技术涉及制备展示降低的效应子活性的Fe变体的方法。_2] 相关领域的描述衍生自抗体的疗法在多种病理学病况,例如癌症、自身免疫疾病、移植排斥和传染病的治疗中使用得越来越多。在2010年,超过37种抗体和衍生的蛋白质被批准用于临床使用和超过1137种处于临床开发中,其中71%是完全的IgG。它们中的大多数(91% )含有来自IgG的Fe区并对应于全长单克隆抗体(mAb)或又称免疫粘附素的融合蛋白(ThompsonPharma2010 年 8 月)。多个研究显示,抗体的效应子功能对免疫疗法,特别是癌症的治疗的效力至关重要,所述癌症的治疗中寻求破坏细胞靶。能够消灭细胞靶的效应子功能主要涵盖抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。⑶C主要通过Fe结构域与第一补体成分Clq的直接结合触发,而ADCP和ADCC则通过Fe结构域与Fe Y受体(FcyR)的结合触发。抗体的Fe结构域也通过与新生Fe受体(FcRn)的相互作用涉及血清持久性。因此在过去十年中已有大量研究集中在通过提高对FcRn的亲和力增强抗体诱导ADCC和CDC应答的能力和增加其血清半寿期上。然而,在一些特定病况的治疗中,ADCCADC和/或ADCP的诱导不是实现治疗效果所必需的。在有些情况下必须避免这些诱导以降低副作用和避免IgG细胞毒性,例如在用抗CD3单克隆抗体orthoclone 0KT3治疗进行的移植排斥的情况下。据显示,orthoclone0KT3的施用诱导促炎性细胞因子的大量全身性释放,这是orthoclone 0KT3与Fe Y受体结合的结构。还显示Fe Y R的活化可能对例如EGFR祀向抗体,西妥昔单抗(cetuximab)的治疗具有负面影响,其被提示活化促肿瘤的M2巨噬细胞和降低患者的无恶化存活(progression-free survival) (Pander J.等人,2011)。一般认为,当抗体或免疫粘附素仅当作针对内源或传染性靶的阻断剂或中和剂或作为细胞受体的激动剂或拮抗剂使用时,通过所述抗体或免疫粘附素的Fe区与Fe YR和Clq的结合的免疫系统的募集对免疫疗法的治疗效力不是关键的,甚至因而应避免。在这方面,据显示4种人IgG亚类表现出不同的效应子功能。一方面,IgGl和IgG3触发ADCC和⑶C 二者的活性。另一方面,IgG2引起⑶C活性但不引起ADCC,而由于对Clq和Fe Y受体的低亲和力,IgG4展示了极差的诱导补体和细胞活化的能力。因此,IgG4已成为不希望募集宿主效应子功能的免疫疗法的优选亚类。中和性IgG4抗体已被批准用于特定病况的治疗。例如,那他珠单抗(natalizumab)是用于治疗多发性硬化的抗α 4整合素mAb。尽管如此,有关IgG4在免疫疗法中的使用仍然存在一些阻碍,因为其体内不稳定性和动力学。作为备选方案,设想了包含氨基酸修饰S228P的IgG4Fc变体。据显示,所述修饰稳定重链二聚体形成 ,伴随低比例(〈8,3%)的仍然可能的Fab臂交换(Labri jn等人,NatureBiotech,2009,27,767-771)。也改造了 IgG杂种以产生具有低效应子功能和改进的药理学谱的新的治疗 mAb (Reddy 等人,The journal of Immunology, 2000,164,1925-1933)。Alexion Pharmaceuticals公司已开发了针对补体组分C5的人源化IgG2 / 4 κ抗体,名为依库丽单抗(Eculizumab)。依库丽单抗的重链在恒定区I (CHl)、铰链区和恒定区2 (CH2)的相邻部分中包含人IgG2序列,在CH2的其余部分和恒定区3(CH3)中包含人IgG4序列。依库丽单抗已被欧洲药品管理局批准用于治疗阵发性夜间血红蛋白尿和溶血性尿毒综合症。基于IgG2和IgG4之间的结构差异,An等人通过在IgG2骨架的对应位置中引入来自IgG4的4个氨基酸(即268Q / 309L1330S / 331S)设想了具有改变的效应子功能的IgG2变体。得到的IgG没有展示出与Clq,Fc YRI和Fe YRIIIa的可检测到的结合并展示出对FcYRIIb / c的弱亲和力,但仍然具有和野生型IgG2相似的血清半寿期(An等人,mAbs,2009, I:6,572-579)。此外,对IgGl的Fe区的多个位点特异性和随机诱变研究已导致鉴定了参与IgGl与Clq和多种促ADCC受体的结合的关键氨基酸(综述见Strohl, Current opinion inBiotechnol,2009,20,685-691)。据显示,在下游铰链结构域中的氨基酸,并且特别是第234和235位的亮氨酸残基对于IgGlFc区对Clq, FcyRLFcy RII和Fe y RIII的亲和力至关重要。在CH2结构域中也发现了决定簇位置,例如氨基酸位置327,330和331,其突变可大大降低诱导ADCC和CDC应答的能力。因此,Xu等人指出,在基于人IgGl的0KT3抗体中引入突变234A / 235A显著降低了与Fe Y RI,FcyRII和Clq的结合,这避免了使用未修饰的0KT3抗体观察到的细胞因子释放综合症,而同时保留了逆转进行的移植排斥的能力(Xu等人,Cell Immunol, 2000,1:16-26)。Hezareh等人在包含突变234A / 235A的抗HIV-1IgGl变体中进行了有关对效应分子的亲和力的 相同的观察(Hezareh 等人,Journal of virology, 2001,12161-12168)。同样地,Oganesyan等人描述了在抗CD19IgGl中引入三突变234F / 235E /331S导致与若干效应分子,即FcyRI,Fe Y RIIa和FcyRIII和Clq的结合的完全丧失(Oganesyan 等人 Acta cryst.,2008, D64, 700-704)。相似地,InvivoGen公司出售编码包含突变233P / 234V / 235A / 236Del /327G / 330S / 331S的人的改造的IgGlFc变体的质粒。这些突变大大降低了 IgGl Fe变体诱导ADCC和⑶C的能力。上述所有这些专利技术暗示将人氨基酸替换为不预期出现在这些位置上的残基,当在对患者施用的mAb中使用这些残基时将可能引起免疫反应。也显示在Fe区第297位的天冬酰胺处的糖基化对单克隆抗体结合Fe Y R和触发ADCC的能力具有直接影响(综述见AbSs等人,Pharmaceuticals, 2010, 3,146-157)。尽管在现有技术中描述了展示低ADCC和CDC活性的Fe变体,仍然需要制备展示对Clq和Fe Y受体的降低的亲和力的新的Fe变体的方法。专利技术概沭本专利技术涉及生产包含Fe区的亲本多肽的变体的方法,相比所述亲本多肽,所述变体展示与蛋白质Clq和与至少一种受体Fe本文档来自技高网...

【技术保护点】
生产包含Fc区的亲本多肽的变体的方法,所述变体展示出相比所述亲本多肽降低的与蛋白质C1q和/或与至少一种受体FcγR的结合,其中在亲本多肽的Fc区中引入氨基酸修饰,所述氨基酸修饰选自由下述组成的组:(i)294Del,其中所述氨基酸修饰294del是引入亲本多肽的Fc区中的唯一氨基酸修饰,(ii)293Del,和(iii)293Del/294Del,Fc区中的氨基酸的编号指根据EU索引,或在Kabat中的等同物的编号。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:A·丰泰纳S·若里约克斯C·莫内马尔斯P·蒙东A·卡拉特K·布阿亚迪
申请(专利权)人:法国血液分割暨生化制品实验室
类型:发明
国别省市:法国;FR

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